胰岛素通过Akt/FoxO/SVV信号通路抑制缺血再灌注损伤诱导心肌微血管内皮细胞凋亡的作用研究

摘要：

目的：探讨胰岛素（ INS）在抑制缺血再灌注损伤（ IRI）诱导的心肌微血管内皮细胞（ CMECs）凋亡中的作用及其分子机制。方法分离和培养大鼠CMECs，建立模拟缺血再灌注（ SI/R）模型，分别选用INS、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）特异性抑制剂渥曼青霉素（Wort）和FoxO1/3a干扰RNA处理细胞。采用随机数字表法对大鼠CMECs进行分组：SI/R组（5只大鼠的CMECs），SI/R＋INS组（5只大鼠的CMECs），SI/R＋INS＋Wort组（5只大鼠的CMECs），SI/R ＋ INS ＋ FoxO1 siRNA 组（6只大鼠的 CMECs），SI/R ＋ INS ＋ FoxO3a siRNA 组（4只大鼠的CMECs）。采用末端转移酶标记技术（ TUNEL）检测各组CMECs凋亡率，ELISA法检测各组Caspase-3活性，Western blotting法检测各组p-Akt（Ser473）、p-FoxO1（Ser256）、p-FoxO3a（Thr32）、生存素（SVV）蛋白表达水平。结果与SI/R组比较，SI/R ＋INS 组、SI/R ＋INS ＋FoxO1 siRNA 组、SI/R ＋INS ＋FoxO3a siRNA 组 CMECs 凋亡率及Caspase-3活性均降低（ P＜0.01）；而SI/R＋INS＋Wort组CMECs凋亡率及Caspase-3活性与SI/R组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；与SI/R＋INS组比较，SI/R＋INS＋FoxO1 siRNA组、SI/R＋INS＋FoxO3a siRNA组CMECs凋亡率及Caspase-3活性升高（P＜0.01）；且SI/R＋INS＋FoxO1 siRNA组CMECs凋亡率高于SI/R＋INS＋FoxO3a siRNA组（P＜0.01）。Western blotting检测结果显示：SI/R＋INS组p-Akt、p-FoxO1、p-FoxO3a、SVV蛋白表达水平均高于SI/R、SI/R＋INS＋Wort组、SI/R＋INS＋FoxO1siRNA组以及SI/R＋INS＋FoxO3a siRNA组（P＜0.01）；且SI/R＋INS＋FoxO3a siRNA组SVV蛋白表达水平低于SI/R＋INS＋FoxO1siRNA组（P＜0.01）。结论 NIS可显著抑制IRI诱导的CMECs凋亡，其机制可能与激活Akt/FoxO/SVV信号通路相关，且主要通过FoxO3a的激活上调SVV蛋白表达水平，从而抑制CMECs凋亡。

关键词：胰岛素、再灌注损伤、信号传导、内皮细胞、细胞凋亡

分类号：R322.13(人体形态学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81070126

在线出版日期：2015-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1012-1017