miR-200a-3p在胆囊癌中的表达及其作用与机制

摘要：

背景与目的:miR-200a-3p参与了多种肿瘤的生物学过程的调控,但在不同肿瘤中起着不同的作用(促癌基因或抑癌基因).目前,其在胆囊癌中的作用尚不清楚.因此,本研究探讨miR-200a-3p在胆囊癌中的表达及其对胆囊癌细胞生物学功能的影响与机制.方法:采用qRT-PCR法测定32例胆囊癌及癌旁组织、胆囊癌细胞系(GBC-SD、SGC-996、NOZ)及正常人胆囊上皮细胞系HGBEC中miR-200a-3p的表达.采用LipofectamineTM3000试剂盒将GBC-SD及NOZ细胞系分别转染miR-200a-3p模拟物(miR-200a-3p过表达组)、miR-200a-3p抑制物序列(miR-200a-3p沉默组)及阴性对照序列(阴性对照组).MTT实验测定细胞增殖能力,Transwell实验测定细胞侵袭能力,MiRBD/Targetscan7.2/starBase2.0/miRtarbase网站预测miR-200a-3p的下游靶基因,并采用荧光素酶实验验证.Westem blot检测上述3组细胞中靶基因与上皮间质转化(EMT)相关分子蛋白(E-cadherin、vimentin)的表达.结果:qRT-PCR结果显示,胆囊癌组织中miR-200a-3p表达量低于癌旁组织,所有胆囊癌细胞系中miR-200a-3p表达量低于正常人胆囊上皮系HGBEC(均P＜0.05).GBC-SD及NOZ细胞系转染后,与各自的阴性对照组比较,两种细胞的miR-200a-3p过表达组miR-200a-3p表达量明显升高、增殖与侵袭能力明显减弱,两种细胞的miR-200a-3p沉默组miR-200a-3p表达量明显降低、增殖与侵袭能力明显增强(均P＜0.05).在线网站预测显示,miR-200a-3p和Notch2存在潜在结合位点;荧光素酶实验显示,miR-200a-3p导致Notch2野生型质粒pmirGLO-Notch2-3'UT WT荧光素酶活性明显降低,而miR-200a-3p对Notch2突变型质粒pmirGLO-Notch2-3'UTR MUT的荧光素酶活性没有影响.Western blot结果显示,两种细胞的miR-200a-3p过表达组与各自的阴性对照组比较,E-cadherin蛋白表达量升高、vimentin蛋白与Notch2蛋白表达量降低,而3种蛋白在两种细胞的miR-200a-3p沉默组则呈相反的变化(均P＜0.05).结论:miR-200a-3p在胆囊癌中表达降低,并可能起了抑癌基因的作用,其抑制胆囊癌细胞增殖和侵袭的机制可能与靶向下调Notch2从而抑制EMT过程有关.

关键词：胆囊肿瘤;微RNAs;细胞增殖;肿瘤侵润;上皮-间质转化

所属期刊栏目：30

分类号：R735.8(肿瘤学)

在线出版日期：2021-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：917-925