靶向survivin的siRNA诱导肝癌细胞化疗敏感性的研究

摘要：

目的 探讨靶向survivin的siRNA对肝癌细胞化疗敏感性的影响.方法 构建siRNA真核表达载体,稳定转染肝癌细胞HepG2后观察其对丝裂霉素(MMC)作用的转基因后肿瘤细胞的效应.结果 测序证实siRNA真核表达载体构建成功.RT-PCR检测到siRNA在mRNA水平抑制survivin基因表达率达73%.MTT法观测siRNA作用下MMC对HepG2,HepG2/Silence(-)细胞的存活率,结果显示,仅在48 h时,加MMC组细胞的存活率(0.505±0.015)显著低于对照组(0.824±0.322)(P＜0.05).当survivin 的表达被有效抑制时,肝癌细胞存活率(0.520±0.017)在12 h点显著低于对照组(0.741±0.005),且48 h点达到高峰(P＜0.05).免疫印迹法显示,未加MMC前survivin蛋白表达的OD值为34 273±323,加入MMC12,24,48 h survivin蛋白表达的OD值均显著降低(分别为21 415±142,16 771±122和13 672±133),均有统计学差异(均P＜0.05).流式技术检测HepG2/Silence(+)加MMC组12,24,48 h细胞凋亡率与对照组比较,差异有统计学意义.Caspase-3活性检测显示HepG2/Silence(+)细胞在MMC作用下0,12,24,48 h Caspase-3活性分别为0.19±0.05,0.33±0.12,3.79±0.27和9.34±0.86;各时点间差异具显著性(均P＜0.05).结论 靶向survivin的siRNA不仅有效抑制肝癌细胞中survivin的表达,而且增强了细胞对MMC的敏感性,其作用机制系通过增强细胞内caspase-3活性,增加肝癌细胞的凋亡而实现的.

关键词：肝肿瘤、survivin基因、siRNA、丝裂霉素、敏感性

所属期刊栏目：19

分类号：R735.7(肿瘤学)

在线出版日期：2010-11-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：875-880