靶向人SIRT1基因的shRNA真核表达质粒的构建及鉴定

摘要：

目的 构建针对人SIRT1基因的shRNA真核表达质粒,并筛选出对胰腺癌细胞系PANC-1基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体.方法 针对SIRT1基因的mRNA序列设计,分别构建3个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体,经大肠杆菌扩增,酶切,PCR,测序鉴定,转染胰腺癌PANC-1细胞,实时荧光定量PCR和Western blot检测SIRT1 mRNA和蛋白的被抑制情况.结果 经测序证实,成功构建SIRT1-shRNA真核表达质粒,插入的DNA片段的序列与设计序列完全一致.重组质粒转染PANC-1细胞后,SIRT1 mRNA和蛋白水平明显下调;其中以1号重组质粒效应最强.结论 成功构建了携带以SIRT1为靶向的shRNA的重组质粒.其对胰腺癌PANC-1细胞SIRT1的表达具有显著抑制效应.该实验为进一步研究SIRT1的功能和肿瘤的基因治疗提供了实验基础.

关键词：胰腺肿瘤、SIRT1、RNA干扰、shRNA、真核表达质粒

所属期刊栏目：19

分类号：R735.9(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30600594

在线出版日期：2010-05-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：259-263