Darier病ATP2A2基因A68E突变的定点诱变及其突变载体构建
目的 利用大引物PCR技术对发现的中国人Darier病ATP2A2基因A68E突变进行体外定点诱变,并构建携带有突变基因的真核表达载体.方法 首先设计三条引物(包括两条外侧正向和反向引物以及内部突变引物),通过2轮PCR扩增,扩增出含有所需突变位点的片段(ATP2A2-A68E),然后将突变片段克隆入pGEM-T载体中,通过双酶切后进行连接,将目的片段重组至真核表达载体pcDNA3.1中.结果 用大引物PCR法成功构建ATP2A2基因A68E突变片段,测序结果显示了ATP2 A2基因上203位碱基C已变为A,此突变导致ATP2A2基因第68位密码子由丙氨酸变为谷氨酸.结论 pcDNA3.1-ATP2A2-A68E突变体的成功构建,为进一步进行该突变体的结构与功能的研究奠定了基础.
大引物PCR、ATP2A2、毛囊角化病、定点诱变、pcDNA3.1
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R751(皮肤病学与性病学)
2013-03-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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