简并PCR结合RACE技术克隆马尔尼菲青霉未知基因

摘要：

目的 寻找高效克隆马尔尼菲青霉新基因的方法.方法 从生物信息库中找出已知的酿酒酵母、白念珠菌、新生隐球菌、烟曲霉、构巢曲霉SKN7氨基酸保守序列,设计简并引物,PCR扩增获得部分马尔尼菲青霉SKN7 cDNA片段,随后应用RACE技术分别扩增其5'端和3'端未知序列.结果 简并PCR扩增可产生多个条带,以预期大小1100bp处条带最清晰.5'-RAACE得一约900bp大小产物,无非特异性扩增.3'-RACE扩增产物为多条片段,其中以700bp,400bp和200bp条带相对较清晰,纯化、克隆、测序、比对分析后证实700bp大小产物为目的片段.将上述产物序列进行对位拼接,获得一全长约为2.5kb的序列,它编码的蛋白与其他物种Skn7蛋白高度同源,为马尔尼菲青霉SKN7 cDNA.结论 简并PCR结合RACE技术是一种高效、简单、有效的克隆马尔尼菲青霉新基因的方法.

关键词：马尔尼菲青霉、简并PCR、快速cDNA末端扩增

所属期刊栏目：21

分类号：R379;R392.13(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：高等学校博士学科点专项科研基金20050001103

在线出版日期：2008-01-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：660-662