褐藻胶裂解酶的基因克隆及表达条件优化

摘要：

采用大肠杆菌(Escherichia coli)表达海洋弧菌(Vibrio sp.)X511的褐藻胶裂解酶基因,以实现对该酶的大量制备及酶学性质研究.通过序列分析,预测该酶的前20个氨基酸为信号肽,去除信号肽后的蛋白质分子质量约为30 254.28 Da,等电点8.75,分子式为C1368H2100N364O401S6,对应的基因序列命名为alg1987.按如下方案构建重组菌:设计特异性核酸引物,PCR扩增得到alg1987;将重组质粒pET-30(a)-alg1987导入大肠杆菌Trans5α进行测序;提取阳性pET-30(a)-alg1987质粒导入大肠杆菌BL21,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测诱导后的重组菌胞液上清,发现异源表达的褐藻胶裂解酶分子质量大小与预测值相近.对重组菌中的褐藻胶裂解酶进行表达条件优化,结果显示,最适参数为诱导温度16℃,诱导时间16h,诱导剂IPTG浓度0.8 mmol/L.

关键词：褐藻胶裂解酶、基因、克隆、条件优化、表达

所属期刊栏目：36

分类号：Q814(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金31560017;广西自然科学基金重点项目2014GXNSFDA118012;广西科技计划重点研发项目桂科AB16380071;广西科技计划科技基地和人才专项桂科AD17129019

在线出版日期：2018-02-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：120-125