miRNA-424-5p靶向VEGFA对胎衣不下奶牛胎盘胶原蛋白降解的影响

摘要：

[目的]通过探究miRNA-424-5p对奶牛母体胎盘组织胶原蛋白降解的影响,进而明确miRNA-424-5p对奶牛胎衣不下(retained fetal membranes,RFM)发生的调控作用及机制.[方法]检测胎衣正常排出与胎衣不下奶牛母体胎盘组织miRNA-424-5p表达水平,采用qRT-PCR和Western blot方法进行胎衣正常排出与胎衣不下奶牛的母体胎盘组织VEGFA、MMP-2、MMP-9、COL-IV 的表达水平检测.应用生物信息学分析对 miRNA-424-5p 进行靶基因预测,并通过双荧光素酶试验验证miRNA-424-5p与VEGFA的靶向关系.在奶牛子宫内膜上皮细胞中转染miRNA-424-5p mimics和miRNA-424-5p inhibitor进行过表达和沉默miRNA-424-5p.采用免疫荧光技术观察VEGFA在奶牛子宫内膜上皮细胞的表达变化,qRT-PCR和Western blot检测 VEGFA、MMP-2、MMP-9、COL-IV 的 mRNA 与蛋白表达水平的变化.[结果]与健康组相比,RFM 组母体胎盘组织中的miRNA-424-5p mRNA表达水平显著升高(P＜0.01),VEGFA、MMP-2、MMP-9 mRNA与蛋白表达水平极显著降低(P＜0.01),COL-IV mRNA与蛋白表达水平极显著升高(P＜0.01).miRNA-424-5p的潜在靶基因共有152个,并经双荧光素酶试验结果证实VEGFA是miRNA-424-5p的靶基因.过表达和沉默miRNA-424-5p后,免疫荧光结果显示,与对照组相比miRNA-424-5p mimics组VEGFA的表达较低,而miRNA-424-5p inhibitor组VEGFA表达较高;qRT-PCR和Western blot结果显示,过表达miRNA-424-5p,靶基因VEGFA mRNA与蛋白表达水平极显著降低,基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9 mRNA与蛋白表达水平极显著降低(P＜0.01),胶原蛋白COL-IV mRNA与蛋白表达水平极显著升高(P＜0.01),而沉默miRNA-424-5p时VEGFA、MMP-2、MMP-9 mRNA与蛋白表达显著升高(P＜0.01),COL-IV mRNA与蛋白表达水平极显著降低.[结论]miRNA-424-5p可靶向VEGFA调控MMPs表达、胶原蛋白的分解从而引起细胞外胶原降解障碍,是引起胎衣不下发生的重要因素.

关键词：奶牛、胎衣不下、miRNA-424-5p、血管内皮生长因子A、胶原蛋白降解

所属期刊栏目：57

分类号：S852.4;R714.245;R394.2

资助基金：国家重点研发计划;黑龙江省自然科学基金项目

在线出版日期：2024-08-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：3083-3092