基于单克隆抗体的非洲马瘟病毒间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

摘要：

[目的]为有效应对非洲马瘟(African horse fever,AHS)传入我国的风险,研究建立一种基于单克隆抗体(Monoclonal antibody,Mab)的非洲马瘟病毒(African horse fever virus,AHSV)特异性的间接ELISA(indirect ELISA,iELISA)抗体检测方法,利用该方法对我国马匹进行非洲马瘟抗体监测.为有效诊断非洲马瘟提供血清学检测手段.[方法]首先利用AHSV VP7 抗原免疫小鼠制备针对VP7 抗原的单克隆抗体;其次通过对包被抗体浓度、蛋白浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度等反应条件的优化建立AHSV iELISA抗体检测方法.利用1 000份血清确定该方法的临界值,并评估该方法的敏感性和特异性.由3位试验操作者分别对AHSV 敏控阳性血清进行加速试验测定效价,评估该方法的稳定性.通过利用建立的方法对已知的10 份AHSV阳性血清和400份阴性血清进行检测并与国外商品化试剂盒检测结果进行比较;最后用该方法对我国2021 年 18 个省份或地区的 947 份临床样本进行检测来评估我国马匹中AHSV感染风险.[结果]获得了 5 株针对AHSV VP7抗原的单克隆抗体.通过对 5株单克隆抗体筛选确定3G9 单克隆抗体捕获抗原性能最佳.利用3G9 抗体作为包被抗体,通过对不同反应条件优化建立了AHSV iELISA抗体检测方法.确定该方法的临界值为 0.25;经比对试验证实本研究建立的AHSV iELISA方法的敏感性与商品化试剂盒相当.3位操作者分别对敏控血清进行检测,组内变异系数范围分别为3.19%—7.02%、0%—3.11%、0.27%—5.76%,组间变异系数为1.17%—5.03%.37℃加速试验表明AHSV阳性血清7 d内效价稳定,因此证明该方法具有良好的稳定性.该方法与商品化试剂盒进行比较两者总体符合率为100%.通过对我国18个省或地区的947份马血清进行检测,结果表明AHSV抗体阳性率为0%.[结论]成功筛选到了针对AHSV VP7 的单克隆抗体,建立了一种基于单克隆抗体的AHSV iELISA抗体检测方法,该方法具有特异性强、敏感性高、稳定性好,可以实现临床样本中AHSV抗体的检测,因此可以作为AHS血清学监测的一种有效工具.

关键词：非洲马瘟病毒、单克隆抗体、间接ELISA、应用

所属期刊栏目：56

分类号：S858.992.723;R5;Q786

资助基金：国家重点研发计划2021YFD1800500

在线出版日期：2023-09-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：3237-3246