苦参碱对H9N2 AIV感染小鼠NLRP3炎性体信号通路的影响

摘要：

[目的]流感病毒感染引发机体的炎症反应及免疫稳态失衡,由此产生的细胞因子风暴(CS)是引起感染宿主死亡的主要原因.通过探究苦参碱对H9N2 AIV感染小鼠的保护作用及其调节NLRP3炎性体信号通路的特点及作用机制,可进一步完善中药抗病毒的理论依据,为新型抗病毒药物的研发奠定基础.[方法]72只8周龄BALB/c小鼠随机分为空白组(0.1 mL无菌鸡胚尿囊液)、病毒组(0.1 mL 4×105PFU/mLH9N2 AIV)、金刚烷胺组(0.1 mL 4×105PFU/mLH9N2 AIV+100×10-699％金刚烷胺)、苦参碱高浓度治疗组(0.1 mL 4×105PFU/mLH9N2 AIV+40 mL·kg-1苦参碱)、中浓度治疗组(0.1 mL 4×105PFU/mLH9N2 AIV+20 mL·kg-1苦参碱)和低浓度治疗组(0.1 mL 4×105PFU/mLH9N2 AIV+10 mL·kg-1苦参碱),每组12只,含病毒鸡胚尿囊液滴鼻构建小鼠病毒性肺炎模型,灌服或饮水给药治疗连续5 d,试验共进行7 d,观察不同组小鼠的体重变化.在第1、3、5、7天分别取3只小鼠无菌采血并处死,取小鼠肺组织进行病理组织学观察,RT-PCR检测小鼠肺组织中H9N2 NA、NLRP3 NLR基因表达情况,Western Blot检测苦参碱治疗后H9N2感染小鼠肺组织NLRP3炎性体信号通路相关蛋白表达量的变化,小鼠血清用ELISA法测定细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-10表达量的变化.[结果]与病毒组相比,苦参碱高浓度治疗组病理组织学观察中H9N2 AIV感染小鼠肺部水肿的区域明显减少,红细胞渗出减少,炎性细胞数量减少,效果接近金刚烷胺组.7 d时苦参碱高浓度治疗组小鼠肺泡壁完好,肺泡之间分界清楚,肺组织内炎性细胞、浆细胞数量大量减少,与空白组无异;苦参碱中浓度治疗组肺组织少量出血,肺泡内无渗出液,肺泡间隔完好;苦参碱低浓度治疗组可见肺泡内红细胞渗出,大量浆细胞募集,肺泡之间出现融合现象.经过苦参碱和金刚烷胺治疗的各组小鼠肺组织中H9N2病毒基因表达量在3、5和7 d极显著降低(P<0.01).经治疗3、5 d时,苦参碱高浓度治疗组和金刚烷胺组的NLRP3基因和蛋白表达量、TNF-α、IL-1β蛋白表达量极显著降低(P<0.01);7 d时,苦参碱高、中、低治疗组小鼠肺组织中NLRP3基因表达量极显著降低(P<0.01);5 d时苦参碱低浓度治疗组NLRP3蛋白、Caspase-1蛋白和中浓度组Caspase-1蛋白表达量显著降低(P<0.05);3 d、5 d时苦参碱中、低浓度治疗组TNF-α和IL-1β蛋白表达量极显著降低(P<0.01),苦参碱中浓度治疗组IL-10表达量极显著降低.[结论]苦参碱可在体内抑制H9N2 AIV的表达,通过下调NLRP3炎性体信号通路相关蛋白,下调TNF-α、IL-1β 和IL-10的表达,减轻炎症反应,有良好的抗病毒、抗炎作用.

关键词：苦参碱、H9N2 AIV、NLRP3炎性体信号通路

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分类号：S852.65;R589.7;R392.12

资助基金：北京市自然科学基金B类重点项目KZ201510020020

在线出版日期：2023-01-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：4315-4326