山羊Kruppel样转录因子家族在前体脂肪细胞分化中的表达模式及相关性分析

摘要：

[目的]优化山羊前体脂肪细胞体外培养体系,揭示Kruppel样转录因子家族(KLFs)成员在前体脂肪细胞分化过程中的表达模式.[方法]于四川省简阳大哥大牧业有限公司随机选取3只7日龄简州大耳羊为研究对象.放血致死并清洗后,在无菌环境中取其皮下脂肪组织.利用I型胶原酶消化法获得其皮下前体脂肪细胞,待细胞长至细胞密度为80％时传代至6孔培养板中(Fs代),以“150 μmol·L-1油酸+10 mg·L-1胰岛素”前体脂肪细胞进行成脂诱导,并在诱导分化后0d、3d、5d、7d收集细胞,Trizol法提取细胞总RNA,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测KLF2-10,KLF 12和KLF15共11个KLF转录因子家族成员在不同分化阶段细胞中的表达水平,并利用皮尔逊系数分析各个成员mRNA总体表达水平之间的相关性.[结果]150 μnol·L-1油酸+10 mg·L-1胰岛素处理前体脂肪细胞24 h后细胞中开始出现小脂滴,48 h后脂滴数量增多、体积增大,诱导120 h后脂肪细胞分化程度显著增加.RT-qPCR结果显示,脂肪分化标志基因过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)基因随着诱导分化的进行其表达水平持续上升,其中在第7天时其表达水平极显著高于其他各组(P＜ 0.01).KLF2、KLF3、KLF4、KLF、KLF7和KLF15在脂肪细胞中表达水平显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01)高于前体脂肪细胞中表达水平,其中KLF3、KLF6和KLF15在分化5d时表达水平最高,KLF2和KLF4表达水平在7d时最高,而KLF7则在3d时表达水平最高;KLF5、KLF8、KLF9、KLF10和KLF12在前体脂肪细胞中的表达水平极显著高于分化后脂肪细胞中的表达水平(P＜ 0.01),其中KLF8、KLF10和KLF12的表达水平均在5d时达到最低,而KLF5和KLF9则在7d时表达水平最低;相关性分析结果显示KLF家族各成员mRNA在山羊前体脂肪细胞分化过程中总体表达水平存在相关性,KLF12与6个基因具有较强的相关性,其次为KLF4和KLF9,分别与5个成员具有较强的相关性,而KLF2与其他基因均没有较强的相关性.[结论]明确了KLF家族在山羊前体脂肪细胞分化过程中的表达模式,解析了各个成员mRNA表达之间的相关性,为阐明山羊前体脂肪细胞分化的分子机制提供重要的基础数据.

关键词：山羊、前体脂肪细胞、分化、KLF

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资助基金：国家重点研发计划2018YFD0502002;国家自然科学基金31672395;四川省“十三五”畜禽育种攻关项目2016NYZ0045;中央高校基本科研业务费专项基金2017NGJPY06;青藏高原生态畜牧业协同创新中心开放基金QZGYXT01

在线出版日期：2019-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：2341-2351