Krüppel-Like Factor3(KLF3)基因对牛脂肪沉积的作用

摘要：

[目的]通过研究牛KLF3基因对牛脂肪分化和脂肪酸代谢关键基因表达量的作用,进而探讨KLF3基因对脂质沉积的影响.[方法]合成干扰siRNA,筛选得到KLF3基因干扰效率最高SiRNA,分离培养秦川牛肉用新品系新生牛前脂肪细胞生长至70％-90％汇合度时转染筛选得到的KLF3基因SiRNA和阴性对照SiRNA(NC),并进行诱导分化培养至第0天和第4天时,利用荧光定量PCR方法研究分化标志基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor γ,PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白(CCAhT/enhancer-binding proteins α,C/EBPα),脂肪酸代谢关键基因脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase α,ACCα)和脂肪酸结合蛋白4(fatty acid binding protein 4,FABP4)基因在牛脂肪细胞分化不同时期干扰KLF3基因处理组和对照组之间表达量的变化,同时在干扰KLF3基因处理并进行诱导脂肪细胞分化的第4天采用油红0染色法观察干扰KLF3基因处理组和对照组之间脂滴差异及采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法测定甘油三酯含量进一步确定KLF3基因对牛脂肪细胞分化和脂肪酸代谢的作用.[结果]KLF3-Si2具有最高的干扰效率达到73％.转染KLF3-Si2后PPARγ的表达量在牛脂肪细胞诱导分化的第0天和第4天与对照组相比分别下调了58％和37％,达到了差异极显著(P＜0.01),C/EBPα的表达量也分别下调了64％和41％,达到了差异极显著(P＜0.01).脂质代谢的关键基因FABP4的表达量与对照组相比在牛脂肪细胞诱导分化的第0天和第4天分别下调了89％和60％,而ACCα的表达量干扰KLF3处理组与对照组相比在脂肪细胞诱导分化第0天和第4天分别下调了50％和37％,而FAS的表达量则分别下调了73％和19％,都分别达到了差异极显著(P＜0.01).在牛脂肪细胞诱导分化第4天油红0染色和甘油三酯含量测定也发现干扰KLF3基因处理组与对照组相比脂滴减少,甘油三酯含量显著下降(P＜0.05).[结论]干扰牛KLF3基因可以抑制牛脂肪细胞分化和脂肪酸代谢关键基因表达量下调,进而影响脂肪的沉积.

关键词：秦川牛、前脂肪细胞、KLF3、脂肪沉积

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资助基金：国家重点研发计划2018YFD0501700;国家863计划2013AA102505;国家肉牛牦牛产业技术体系CARS-37

在线出版日期：2019-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1272-1281