E2蛋白介导猪瘟病毒的细胞吸附与内化

摘要：

[目的]已有研究显示,猪瘟病毒(CSFV)通过网格蛋白介导的内吞作用侵入宿主细胞,然而参与侵入过程的病毒蛋白尚待阐明.研究旨在明确E2蛋白在CSFV侵入过程中的作用.[方法]通过瞬时转染包装携带E2基因的慢病毒,将慢病毒转导悬浮29 3细胞构建稳定表达重组E2蛋白的悬浮293细胞系,利用亲和层析的方法纯化重组E2蛋白,同时优化表达时间以增加蛋白产量.利用SDS-PAGE和Western blotting分别鉴定了重组E2蛋白的表达水平及其反应原性.通过感染试验、吸附试验以及内化试验分别探究了E2蛋白对CSFV感染、吸附以及内化的影响.将重组E2蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过阻断ELISA检测血清中多克隆抗体的阻断率.利用制备的多克隆抗体与CSFV感作后进行吸附和内化试验,进一步探究了E2蛋白在介导CSFV吸附和内化中的作用.[结果]通过倒置荧光显微镜观察转导慢病毒后的细胞系,与对照细胞相比可见明显的绿色荧光,表明慢病毒成功转导悬浮293细胞.SDS-PAGE结果显示,在还原和非还原条件下均出现与预期大小相符的蛋白条带,经Western blotting验证,上清中表达的重组E2蛋白能够被抗E2蛋白单克隆抗体WH303所识别,表明构建的悬浮293细胞系能够表达重组E2蛋白.通过优化表达条件,悬浮29 3细胞培养第8天时上清中重组E2蛋白浓度最高可达5.84 μg·mL-1.可溶性蛋白阻断试验结果显示,重组E2蛋白具有阻断CSFV感染的活性.利用重组E2蛋白在病毒入侵过程中处理细胞对CSFV的感染同样具有显著抑制作用;阻断ELISA和中和试验结果显示,针对E2蛋白的多克隆抗体能够阻断CSFV感染,且具有良好的中和活性;吸附试验和内化试验证明,重组E2蛋白处理细胞能够显著抑制CSFV的内化,而利用多克隆抗体与CSFV感作后能够显著抑制其吸附.[结论]E2蛋白参与CSFV吸附和内化.

关键词：猪瘟病毒、E2蛋白、悬浮细胞系、吸附、内化

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资助基金：国家自然科学基金重点项目31630080

在线出版日期：2018-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1995-2003