大丽轮枝菌弱致病力菌株Vd171对棉花黄萎病的诱导免疫作用及机制

摘要：

[目的]明确大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)弱致病力菌株Vd171对棉花黄萎病的诱导免疫效果及作用机制,为探索棉花黄萎病生物防治新途径提供依据.[方法]以大丽轮枝菌弱致病力菌株Vd171为研究对象,温室苗期评估不同接种方法、接种时期、接种次数及接种体类型的诱导免疫效果;不同接种方法包括蘸根、灌根、茎部针刺、叶面喷雾和浸种,均采用Vd171分生孢子悬浮液(1×107个分生孢子/mL),蘸根、灌根和叶面喷雾为每钵10 mL,茎部针刺为每株0.2 mL,浸种时间为12 h;不同接种时期试验设置接种棉花黄萎病菌强致病力菌株Vd080前2、4、6、8d及之后的1、2、4d接种Vd171共7个处理;接种次数试验设置接种Vd080前接种Vd171一次和两次;接种体类型采用Vd171的分生孢子悬浮液和查氏培养滤液.采用水培方法培育棉苗,先接种Vd171,4d后接种Vd080GFP,不同时间取根组织,振荡冲洗Vd080GFP分生孢子,显微镜下计数,测定弱致病力菌株免疫后病原菌在棉苗根部的定殖量;接种Vd080GFP后第7天,PDA平板上分离棉苗下胚轴切段,检测病原菌在植株体内的扩展速度.取接种Vd171后不同时段的棉苗,采用qPCR方法检测植株内防御相关酶基因4CL、CHI、POD、PP0和PAL的表达量;测定P0D、PP0、PAL和CHI的活性变化.将棉苗茎部做切片,用间苯三酚染色,显微镜下观察茎部维管束木质化情况;将棉苗叶片用DAB染色,观察叶片活性氧爆发情况.[结果]在接种大丽轮枝菌强致病力菌株Vd080前4d接种Vd171,棉株的免疫效果最好,防治效果达到89.4％;几种接种方法相比较,以蘸根防治效果最好,为70.0％,其次是叶面喷雾,为54.3％,浸种和灌根分别为45.0％和39.0％,而针刺效果最差,为2.2％;接种Vd171一次和两次对棉株均具有较好的免疫效果,其防治效果分别为85.6％和81.4％;先接种分生孢子、培养滤液对棉株均具有较好的免疫效果,其防治效果分别为85.6％和81.1％;先接种Vd171能阻止Vd080在棉花根部的定殖和在植株体内的扩展;Vd171能显著诱导棉苗防御相关基因PAL、4CL和CHI的表达,其中,GhPAL、Gh4CL和GhCHI变化最大,分别为对照处理的2.2、8.5和2.6倍,均显著或极显著高于对照;经Vd171诱导的棉苗下胚轴中PP0、PAL、P0D和CHI酶活性均极显著高于对照,分别较对照提高31.9％、131.0％、57.1％和102.1％,子叶中PAL、CHI和P0D酶活性也显著高于对照,分别较对照提高22.1％、39.6％和7.1％,PP0酶活性与对照无显著差异;先接种Vd171诱导了细胞木质化和活性氧的爆发.[结论]大丽轮枝菌弱致病力菌株Vd171可以有效地诱导棉花对黄萎病产生抗性,在棉花黄萎病防治上具有较好的应用前景.

关键词：棉花、黄萎病、大丽轮枝菌、弱致病力菌株、诱导免疫

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资助基金：国家重点研发计划2016YFD0100505;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项161016201702

在线出版日期：2018-06-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：1067-1078