CD163双等位基因编辑猪的制备及传代

摘要：

[目的]猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS),俗称“蓝耳病”,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种高致死性传染病,对世界养猪业造成了巨大的经济损失.由于PRRSV遗传变异性较大,因此国内外并未有理想疫苗能够对此病进行有效防制.Cluster of differentiation 163 (CD163)是PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)的受体之一,研究旨在利用CRISPR/Cas9技术结合体细胞核移植技术制备CD163基因编辑的大白猪.[方法]针对猪CD163基因的第7外显子设计构建CRISPR/Cas9基因编辑载体;转染大白猪胎儿成纤维细胞,获得基因编辑阳性细胞克隆;以基因编辑细胞为核供体、体外成熟的猪卵母细胞为核受体构建克隆胚胎;胚胎移植到受体母猪生产CD163基因编辑猪,并进行后续的扩繁试验.[结果]设计的gRNA能够高效的识别靶位点.对获得的127个细胞单克隆进行PCR和测序显示,共有21个克隆发生突变,其中14个克隆为单等位基因突变或双等位基因杂合突变,7个克隆为双等位基因纯合突变.通过体细胞核移植技术,成功获得了CD163双等位基因编辑的纯合大白猪;并获得首批F1代CD163基因编辑仔猪,目前健康状态良好.随后将有更多的F1代CD163基因编辑猪陆续出生.[结论]制备的无抗性筛选标记的CD163双等位基因编辑猪,能够安全并快速地为培育抗PRRSV新品种猪提供育种材料.

关键词：CD163、CRISPR/Cas9、猪、猪繁殖与呼吸综合征

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资助基金：转基因生物新品种培育重大专项2016ZX08010-004;中国农业科学院科技创新工程ASTIP-IAS05

在线出版日期：2018-05-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：770-777