侵染西番莲的夜来香花叶病毒的分子鉴定及特异性检测

摘要：

[目的]鉴定福建果园西番莲上的夜来香花叶病毒(Telosma mosaic virus,TeMV),并建立用于该病毒特异性检测的分子快速检测方法,为该病毒的防治提供参考依据.[方法]采用血清学检测、电镜观察、通用简并引物RT-PCR、特异性引物RT-PCR对福建西番莲样品进行病毒检测,并对阳性样品的PCR产物进行克隆、测序;根据已报道的夜来香花叶病毒基因序列和本研究的序列测定结果,设计一对用于扩增 TeMV 外壳蛋白(coat protein,CP)基因全长的特异性引物,通过反应条件优化,建立该病毒的特异性RT-PCR检测方法;序列测定结果利用BLAST程序和DNAMAN软件进行比对,同时对获得的CP基因序列采用MrBayes软件的贝叶斯法(Bayesian inference,BI)构建系统发育树并进行系统发育分析.[结果]血清学检测发现,一株表现有花叶、皱缩症状的西番莲样品与马铃薯Y病毒属(Potyvirus)通用抗体反应呈阳性;电镜观察结果表明,该株疑似带毒样品中含有大小约750 nm×12 nm的弯曲线状病毒粒子;Potyvirus通用简并引物RT-PCR从该样品中扩增到一条与预期大小相符的目的片段,克隆、测序获得长度为680 bp的序列,该序列与已报道的TeMV核苷酸序列一致性最高(98.2%).特异性引物扩增获得的CP基因序列全长为816 bp(命名为BXGFJ-13分离物),与已报道的TeMV核苷酸序列、氨基酸序列一致性分别为86.2%—98.4%和88.2%—97.8%.系统发育分析结果表明,13个TeMV分离物共形成3个类群,相同地区或寄主来源的分离物优先相聚成簇,表现出很强的地理和寄主特异性.本研究获得的BXGFJ-13分离物与中国广西分离物(KJ789129)先以较高的后验概率聚为一个分支,再与泰国2个分离物(AM409188、AM409187)聚为第2类群(Group Ⅱ),表明其在系统发育关系上与中国广西分离物的亲缘关系最近.利用特异性引物TeMV-CPf/TeMV-CPr建立的RT-PCR方法,具有良好的特异性,仅能从感染TeMV的西番莲样品上扩增出目的片段,而从黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、甜菜花叶病毒(Beet mosaic virus,BtMV)、大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)、虎眼万年青花叶病毒(Ornithogalum mosaic virus,OrMV)、洋葱黄矮病毒(Onion yellow dwarf virus,OYDV)、东亚西番莲病毒(East Asian Passiflora virus,EAPV)等其他病毒样品及阴性对照上均未扩增出目的片段.灵敏度测定结果显示,该方法能从稀释102倍的RNA上扩增出目的片段.[结论]根据国际病毒分类委员会(ICTV)关于Potyvirus病毒不同成员的分类标准,同时结合血清学检测、电镜观察结果,证实福建果园表现花叶、皱缩症状的西番莲上携带有TeMV;建立的特异性RT-PCR方法能够用于TeMV的快速检测.

关键词：西番莲、夜来香花叶病毒、分子鉴定、检测

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分类号：S43;S76

资助基金：国家质检公益性行业科研专项201410076;福建省现代农业水果产业技术体系岗位项目闽农科教〔2017〕129;福建省农业科学院新兴特色果类创新团队STIT2017-2-4;福建省农业科学院院管A类项目三农业一融合A2017-15

在线出版日期：2018-01-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：4725-4734