10.3864/j.issn.0578-1752.2015.02.14
大足黑山羊 PHLDA2基因的克隆、组织表达与印记状况分析
【目的】克隆大足黑山羊 PHLDA2(pleckstrin homology-like domain, family A, member 2)基因序列,分析其组织表达特征、印记状况以及与胎盘性状的关系,为深入研究该基因在山羊胎盘中的功能积累数据。【方法】根据人、牛和猪 PHLDA2的保守区域设计引物以 RT-PCR 方法扩增大足黑山羊该基因部分 cDNA 序列,进一步利用5′-和3′-RACE 技术获得全长 cDNA 序列;利用 ORF Finder 和 ProtParam 等在线工具分析 PHLDA2基因序列特征;采用 Real-time PCR 方法分析 PHLDA2在大足黑山羊心、肝、脾、肺、肾、大脑、肌肉、脂肪、舌和胎盘等10个组织的表达差异;寻找大足黑山羊和波尔山羊 PHLDA2基因序列 SNP 位点,基于表达 SNP 的方法分析该基因在 F1代组织中的印记状况;采用线性回归的方法分析 PHLDA2表达量与胎盘性状的关系。【结果】克隆得到935 bp 大足黑山羊 PHLDA2的 cDNA 全长序列,其中5′-UTR、3′-UTR 和编码序列分别为62 bp、450 bp 和420 bp,其编码140个氨基酸。预测的山羊 PHLDA2蛋白分子量大小为15638.7 Da,等电点为9.18,二级结构由α-螺旋(37.14%)、β-转角(9.29%)、延伸链(23.57%)和无规卷曲(30%)组成,并且包含保守的 PH(pleckstrin homology)结构域。③BLAST 分析发现,山羊 PHLDA2定位于29号染色体,其与牛、猪、猕猴、马和人同源基因核苷酸序列的相似性分别达到91%,90%,90%,90%和89%,在核苷酸和氨基酸序列上与牛的亲缘关系最近。④荧光定量 PCR 结果显示PHLDA2在山羊胎盘中表达量最高(P <0.01),在心、肝、肺、肾、肌肉、脂肪、舌和大脑组织中表达量很低且差异不显著(P >0.05),在脾中未检测到表达。⑤印记分析表明,PHLDA2在初生山羊胎盘、心脏和肝脏组织表达母源等位基因,但在肺、大脑和肌肉组织为双等位基因表达。⑥PHLDA2表达水平与山羊胎盘重回归关系显著(n=15,R2=0.855,P <0.01)。【结论】山羊 PHLDA2基因序列和结构特征具有物种间的保守性,但是其印记状况具有组织特异性; PHLDA2为山羊胎盘的生长和功能调控的重要基因。
山羊、PHLDA2、基因克隆、荧光定量PCR、组织表达、印记分析
TS207.4;S881.2;R181.3
重庆市科委自然科学研究项目;中央高校基本科研业务费专项
2015-02-10(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共9页
343-351