HSPA2在牦牛不同组织器官中的表达差异
【目的】探索热休克蛋白70-2(heat shock 70kD protein-2, HSPA2)在牦牛不同组织器官中的表达差异。【方法】选取3头1岁龄的健康青海高原雄性牦牛为研究对象，在正常生理条件下，于2013年9月中旬采集不同组织器官（心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑和睾丸）样本。（1）从牦牛不同组织器官中提取 RNA，将 RNA 反转录成第一链 cDNA，参照牦牛HSPA2和β-actin基因序列（登录号为 KC790105.1和 DQ838049.1）设计特异性引物，首先采用 RT-PCR 来验证实时荧光定量 PCR（RT-qPCR）是否能应用于牦牛不同组织器官中HSPA2表达差异的测定；然后采用 RT-qPCR 测定牦牛不同组织器官中HSPA2相对表达量的差异。（2）将牦牛不同组织器官样本4％多聚甲醛固定，制成石蜡切片，免疫组织化学法测定 HSPA2在不同组织器官中的分布。采用 Image-Pro Plus 6.0软件进行免疫组化图像分析，测定 HSPA2阳性反应物的积分光密度，进行吸光度分析；通过 SPSS 19.0统计软件，用单因素方差分析进行差异显著性测定。【结果】(1) RT-PCR 结果表明 RT-qPCR 法可用于牦牛不同组织器官中HSPA2表达差异的测定。实时荧光定量 PCR 结果表明，HSPA2在睾丸中的相对表达量，分别是在脑、肾脏、心脏、脾脏、肺脏和肝脏中的83.33、97.09、111.11、133.33、222.22和285.71倍。(2)免疫组织化学结果显示，牦牛睾丸、肾脏、脑、心脏、肺脏、肝脏和脾脏中均有 HSPA2的阳性表达。其中，在牦牛肾脏皮质肾小管、髓质肾小管，大脑皮质海马CA1区、小脑皮质，心肌细胞，肺泡上皮细胞，肝细胞，脾脏边缘区和红髓中有 HSPA2阳性反应，着色深浅不等，大部分阳性反应位于细胞质，细胞核阳性反应极少；而在睾丸曲精小管中生精细胞细胞质和细胞核中均有 HSPA2阳性反应，着色深浅不等；阴性对照组未观察到阳性反应。根据积分光密度值比较得出，HSPA2蛋白的阳性表达量在睾丸中最高，脑、肾脏、心脏、肺脏和肝脏次之，脾脏最少。【结论】通过基因水平和蛋白水平两个层面的研究，发现 HSPA2在牦牛各组织器官中存在表达差异；睾丸中 HSPA2基因和蛋白表达量均高于脑、肾脏、心脏、脾脏、肺脏和肝脏，提示 HSPA2可能与睾丸的生殖功能密切相关。
HSPA2、牦牛、不同组织器官、实时荧光定量 PCR、免疫组化
R734.2;R392;R542.220.5
国家自然科学基金31360594
2014-09-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
3475-3482
