NaCl和Na2CO3对不同棉花基因组的DNA甲基化影响
【目的】探究不同盐胁迫后的棉花基因组 DNA 甲基化变化情况，并比较分析叶片和根部 DNA 甲基化变化差异，进而探究DNA甲基化与棉花耐盐性之间的关系。【方法】以陆地棉耐盐品种中9806和盐敏感品种中S9612为试验材料，分别用NaCl和Na2CO3（浓度均为0.4%）处理。提取对照和处理材料的DNA，进行双酶切、连接、预扩增和选择性扩增，然后采用MSAP技术（甲基化敏感扩增多态性）分析棉花幼苗在盐胁迫前后的DNA甲基化情况。从聚丙烯酰胺凝胶中回收纯化多态性片段并进行测序，通过NCBI进行比对分析；设计引物，用实时荧光定量PCR对多态性片段在棉花幼苗中的表达量进行验证。【结果】盐胁迫分析表明不同类型盐胁迫对棉花幼苗的影响不同；0.4%的中性盐NaCl对棉花幼苗的影响相对较小，各部分组织的形态变化不明显，而0.4%的碱性盐Na2CO3对棉花幼苗的影响较大，使棉花幼苗子叶变软，茎基部和根部发黑；MSAP分析结果表明，NaCl胁迫后中9806和中S9612叶片的甲基化比率分别为23.5%和27.7%，其中，全甲基化比率分别为20.3%和22.9%，根部的甲基化比率分别为24.7%和27.1%，其中，全甲基化比率分别为19.6%和21.6%；Na2CO3胁迫后中9806和中S9612叶片的甲基化比率分别为28.9%和28.1%，其中，全甲基化比率分别为24.3%和24.5，根部的甲基化比率分别为25.7%和27.6%，其中，全甲基化比率分别为21.5%和24.0%。叶片和根部甲基化水平存在差异，随着盐类型由中性盐向碱性盐转变的过程中，基因组DNA甲基化水平迅速增加，并在Na2CO3处达到最大值。通过分析胁迫以后的甲基化状态，在NaCl和Na2CO3胁迫后，中9806叶片的甲基化条带所占多态性条带比率分别为40.00%和50.00%，去甲基化条带所占多态性条带比率分别为54.12%和46.67%，中9806根部的甲基化条带所占多态性条带比率分别为35.53%和43.59%，去甲基化条带所占多态性条带比率分别为56.58%和51.28%。而中 S9612叶片和根部中的甲基化条带比率和去甲基化条带比率的变化不明显。对多态性片段回收共获得6条序列，这6条序列涉及不同的同源基因，在基因编码区和非编码区均有分布，参与不同的代谢反应。qRT-PCR分析结果表明，6个同源基因在对照和处理之间的表达差异显著。【结论】耐盐性不同的棉花品种对盐胁迫反应不同，耐盐品种中9806在中性盐NaCl胁迫后基因组甲基化水平降低，诱导相关耐盐基因表达来抵抗胁迫而盐敏感品种中S9612则缺乏相应的耐盐基因使植株受到伤害增加，在 Na2CO3处理以后受到伤害最大，对照与处理间甲基化水平差异显著，叶片和根部甲基化水平存在差异，具有组织特异性；多态性片段比对分析可知，同源性基因涉及多条代谢途径，通过多种代谢途径间的协同作用来抵抗胁迫。
棉花、DNA甲基化、MSAP、盐胁迫、实时荧光定量PCR
S51;S43
国家863计划项目2013AA102601
2014-09-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共11页
3134-3144
