一株中等毒力牛种布鲁氏菌的鉴定和毒力测定

摘要：

对初步鉴定的牛种布鲁氏菌分离株（B. abortus 343）进行全面的生物学特性检定，为深入研究布鲁氏菌病提供参考菌株。将B. abortus 343划线培养及梯度稀释，使其形成单个菌落，观察菌落形态。挑取单个菌落进行革兰氏染色和柯氏染色，观察其染色特点；分别接种1.5×106 CFU到含硫瑾（1﹕25000）或含碱性复红（1﹕25000）的TSA平板上，观察其生长状态；将接种有B. abortus 343的TSA平板分别置于普通培养箱和CO2培养箱37℃培养72 h，观察其对CO2的依赖性；通过醋酸铅试纸条测定B.abortus343代谢过程中是否释放H2S。通过平板凝集试验测定布鲁氏菌单相特异性血清（牛种布鲁氏菌单因子血清A、羊种布鲁氏菌单因子血清M 和布鲁氏菌粗糙型血清R ）与B. abortus 343抗原的反应性；利用布鲁氏菌AMOS-PCR种属分型等方法对B. abortus 343进行了PCR种属特性鉴定；将B. abortus 343免疫小鼠，分别测定其抗血清与光滑型和粗糙型抗原的反应性；通过小鼠和豚鼠感染试验，全面评价该分离株的毒力；分别以1×105 CFU感染6周龄Balb/c小鼠，测定B.abortus343在小鼠体内存活时间；以1×109 CFU感染Hartley豚鼠，2周后测定试验豚鼠每克脾脏含菌量；分别以10000、1000、100、25 CFU/只4种不同剂量感染豚鼠，初步测定分离株对豚鼠的最小感染量（MID），在此基础上，进一步以40、60和90 CFU/只测定MID。分离株B. abortus 343为光滑型牛种布鲁氏菌，菌落逆光观察微带蓝绿色乳光；革兰氏染色为阴性，柯氏染色为红色，H 2 S试验阳性。该菌能在含硫瑾和碱性复红的培养基上生长，不依赖于CO 2。B. abortus 343抗原能与A因子血清呈明显凝集反应，免疫小鼠后能产生特异性抗体。以1×105 CFU感染6周龄Balb/c小鼠，可在小鼠体内存活29周；以1×109 CFU感染350-400 g雌性豚鼠，14 d后豚鼠每克脾脏含菌量2.4×105-1.2×106；以1×105 CFU感染豚鼠1个月后，所有试验豚鼠均能产生特异性光滑型抗体，试管凝集效价为320-1280；B. abortus 343对豚鼠的最小感染量约为40 CFU。鉴定了一株中等毒力牛种布鲁氏菌（B.abortus343），为深入研究布鲁氏菌病提供了参考菌株，丰富了布鲁氏菌菌种资源。

关键词：布鲁氏菌、AMOS-PCR、最小感染量、毒力

分类号：S482.2;S852.65;Q95-33

资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）2012AA101302

在线出版日期：2014-08-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：2652-2658