ChREBP基因siRNA表达质粒构建及对原代培养猪脂肪细胞生脂的影响

摘要：

[目的]构建ChREBP基因siRNA表达质粒，干扰ChREBP在原代培养猪脂肪细胞的表达，研究其在葡萄糖诱导脂肪细胞生脂中的作用。[方法]合成4对靶向ChREBP基因的siRNA寡核苷酸，分别连接于pcDNA?6.2-GW/EmGFP载体构建siRNA表达质粒，测序验证后，采用脂质体介导法转染从3日龄仔猪皮下脂肪组织分离培养的脂肪细胞，荧光定量RT-PCR检测ChREBP基因沉默效率；以葡萄糖浓度为0-20 mmol·L-1的培养液培养转染细胞48 h，测定生脂及生脂基因表达变化。[结果]筛选出了1个转染效果好、ChREBP基因沉默效率达85%的siRNA表达质粒，转染原代培养猪脂肪细胞后，细胞生脂水平及生脂基因ACC1和FAS mRNA表达比阴性对照表达质粒转染细胞和未转染细胞显著降低（P＜0.05），且生脂水平不受葡萄糖水平的影响（P＞0.05）。[结论]构建的siRNA表达质粒能有效干扰猪脂肪细胞ChREBP表达，葡萄糖通过转录因子ChREBP调控猪脂肪细胞生脂及生脂基因表达。

关键词：ChREBP、siRNA、猪、脂肪细胞、脂肪生成

分类号：Q93-31;S828.2;Q81

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2014-01-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：5196-5204