绿盲蝽水溶性海藻糖酶ALTre-1基因原核表达、纯化与酶学特性

摘要：

[目的]在前期克隆了绿盲蝽水溶性海藻糖酶(ALTre-1)基因的基础上,以获得具有酶活性的重组蛋白,明确酶促反应的最佳pH值及最适温度,为绿盲蝽海藻糖酶分子调控机制及其抑制剂的应用研究奠定基础.[方法]将含有绿盲蝽ALTre-1基因的T载体经NdeⅠ和Not Ⅰ双酶切,构建ALTre-1基因原核表达载体(pET28a-ALTre-1),表达载体经诱导表达和蛋白纯化,获得ALTre-1功能区纯化蛋白.在蛋白浓度为0.3 mg·mL-1 的条件下,以海藻糖为底物,对纯化得到的重组Tre-1蛋白进行活性检测,确定其酶促反应的最佳pH值和最佳温度.[结果]ALTre-1基因在大肠杆菌中BL21中能够高效表达,纯化获得的重组蛋白在试验条件下有较高的海藻糖酶水解活性((184.83±13.39) nmol·μg-1·min-1).重组ALTre-1蛋白活性最适pH值为7.0(酶活性为(202.04±13.76)nmol·μg-1·min-1),表明重组ALTre-1蛋白是1个在中性环境中具有最佳活性的海藻糖酶,同时重组ALTre-1 蛋白酶活性最适温度为55℃(酶活性为(228.59±4.62) nmol·μg-1·min-1).[结论]本研究克隆得到了ALTre-1全长基因,获得了具有海藻糖酶活的重组蛋白,该重组蛋白在pH 7.0、温度55℃条件下酶活性最高.

关键词：绿盲蝽、水溶性海藻糖酶、原核表达、酶学特性

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资助基金：国家公益性行业农业科研专项201103012;国家现代农业产业技术体系建设专项资金CARS-18-16;国家科技支撑计划项目2012BAD19B05

在线出版日期：2013-12-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：3587-3593