Pen a 1表位抗原多克隆抗体的制备及鉴定

摘要：

[目的]建立一种识别、检测致敏蛋白的新方法.[方法]Pen a 1为虾中主要的致敏蛋白,从其5 个主要IgE结合区中选择一段具有代表性的(85-105位)含21个氨基酸的多肽序列,进行化学合成,将多肽分别与匙孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,制得免疫原和包被原,免疫原免疫新西兰纯种白兔得到多克隆抗体.以刀额新对虾蛋白、卵清蛋白、花生蛋白和牛奶蛋白为样品,免疫印迹鉴定多克隆抗体对刀额新对虾中Pen a 1蛋白的特异性.[结果]经 Ellman试剂测定多肽与 KLH、BSA的偶联比分别为12:1和8:1.间接非竞争 ELISA 测定多克隆抗体的效价达1.024×106,间接竞争ELISA (icELISA)测定该多克隆抗体对多肽的IC50和IC10分别为0.4324 μg.mL-1和0.0004 μg.mL-1,表明多克隆抗体对多肽具有较强的灵敏性.免疫印迹试验结果表明,此多克隆抗体仅可识别刀额新对虾蛋白中的Pen a 1蛋白,对所选其它物种蛋白无响应.[结论]通过人工合成多肽制备的抗体可用于目标致敏蛋白质的检测分析,该方法快捷灵敏,且具有较高的特异性.

关键词：Pen a 1、表位多肽抗原、多克隆抗体、间接竞争ELISA、免疫印迹

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资助基金：农业部公益性行业科研专项201103007;国家“十二五”科技支撑计划课题2011BAK10B03

在线出版日期：2013-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：3191-3198