玉米大斑病菌STK2的基因组定位、蛋白质结构预测及其表达

摘要：

[目的]确定玉米大斑病菌STK2在基因组中的位置；解析目的蛋白质Stk2的结构特征；构建STK2真核表达载体,获得真核表达体系中的胞外分泌蛋白.[方法]利用生物信息学方法,确定STK2在玉米大斑病菌基因组中的确切位置,解析Stk2蛋白质的结构特征；根据STK2的ORF序列及真核表达载体pPIC9K的多克隆位点设计引物,构建真核表达载体,采用电击转化法将重组质粒转入宿主菌GS115中进行诱导表达,利用SDS-PAGE检测并鉴定目的蛋白质.[结果]玉米大斑病菌STK2的ID为91433,该基因位于scaffold_3正链的1561986-1563262位置;Stk2蛋白具有MAPK类蛋白激酶的特征性保守结构域,其二级结构主要以α螺旋和无规则卷曲为主,β折叠较少且主要存在于N端,其三级结构具有1个较小的N端域和1个较大的C端域；成功构建了STK2的真核表达载体pPIC9K-STK2,筛选获得了抗性转化子;在毕赤酵母菌中,经甲醇诱导得到了1个分子量约为41 kD的蛋白质组分且被分泌至胞外,该蛋白质的大小与理论分子量相符,推测Stk2蛋白已在宿主菌中表达并被分泌至胞外.[结论]玉米大斑病菌STK2位于scaffold_3正链的1561986-1563262位置；Stk2具有MAPK激酶的所有特征性保守结构域,属于典型的MAPK蛋白激酶；该基因能在真核细胞中表达,获得了可溶性分泌蛋白质,为Stk2蛋白的多克隆抗体制备及基因的功能研究奠定基础.

关键词：玉米大斑病菌、生物信息学分析、真核表达、MAPK

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资助基金：国家自然科学基金30471126;河北省自然科学基金C2010001854,C2012204033

在线出版日期：2013-10-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：2599-2606