秦川牛FABP4基因重组腺病毒载体的构建与鉴定

摘要：

[目的]旨在通过构建秦川牛FABP4基因的重组腺病毒载体,为在细胞水平研究FABP4基因的功能和作用机制做准备.[方法]根据GenBank收录的牛FABP4基因mRNA序列设计引物,PCR扩增并克隆测序.将目的基因连接到穿梭载体pAdTrack-CMV上并用PmeI线性化后,转化含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的E.coliBJ5183感受态细胞进行同源重组,得到重组质粒pAd-FABP4,并用PacI酶切鉴定.将经过PacI线性化的pAd-FABP4转染HEK 293A细胞进行病毒包装和扩增,TCID50法测定病毒滴度.[结果]经测序鉴定本次克隆的FABP4序列与GenBank收录的一致. 酶切鉴定、绿色荧光观察、PCR及测序检测均证明,重组腺病毒载体构建成功并获得重组腺病毒AD-FABP4,病毒滴度为1.58×109 PFU·mL-1.[结论]成功构建了秦川牛FABP4基因重组腺病毒载体并获得高滴度的重组腺病毒.

关键词：秦川牛、FABP4基因、pAdTrack-CMV、pAdEasy-1、腺病毒

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资助基金：国家“863”计划项目2011AA100307-02,2013AA102505;国家自然科学基金项目31272411,31000998;国家“十二五”科技支撑计划2011BAD28B04-03;国家转基因生物新品种培育重大专项2011ZX08007-002;国家肉牛牦牛产业技术体系CARS-38;长江学者和创新团队项目IRT0940;陕西省科技统筹创新工程计划2011KTCL02-07

在线出版日期：2013-12-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1434-1440