藜CaMAPKK2的表达分析及盐胁迫信号通路互作组分的筛选

摘要：

[目的]通过对抗逆植物藜的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联途径中MAPKK的胁迫表达模式分析及信号转导途径互作组分的筛选,探索植物藜响应外界胁迫信号诱发逆境耐受的机制.[方法]以藜叶片总RNA为模板,利用定量PCR方法对NaC1、H202和ABA胁迫下藜MAPKK表达规律进行了分析.利用RT-PCR结合RACE技术获得了藜MAPKK的全长cDNA序列.利用酵母双杂交技术对MAPKK盐胁迫信号通路互作组分进行了分析.[结果]获得一个藜MAPKK的全长cDNA序列,命名为CaMAPKK2,其开放阅读框为1 089 bp,编码一个由362个氨基酸组成的丝裂原活化蛋白激酶.定量PCR显示CaMAPKK2受盐胁迫诱导明显上调表达,同时受外源H202和ABA调控.H2O2合成抑制剂DPI与ABA合成抑制剂Na2WO4显著抑制了300mmol.L-1NaC1处理下CaMAPKK2的表达.以全长CaMAPKK2为诱饵蛋白,利用酵母双杂交技术筛选到5个可能与CaMAPKK2相互作用的蛋白.测序结果显示,其中1个序列可通读,该cDNA序列长794 bp,与欧洲赤杨(Alnus glutinosa)和拟南芥的噻唑合成酶(thiazole biosynthetic enzyme)基因AgTHI1和AtTHI1核酸序列相似度达79％和78％,其它4个序列没有连续的读码框.[结论]CaMAPKK2受NaCl和H2O2诱导上调表达,暗示盐胁迫可能通过诱导H2O2和ABA的积累从而导致CaMAPKK2表达增加.要进一步筛选CaMAPKK2互作组分需获得更多阳性克隆并开展相关功能验证试验.

关键词：藜、盐胁迫、信号转导途径、MAPKK、酵母双杂交、定量PCR

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资助基金：国家科技部"973"前期项目2012CB722204;国家自然科学基金30660012;新疆自治区科技攻关重大专项200731138-3;新疆生物资源与基因工程重点实验室开放基金XJDX0201-2007-03,XJDX0201-2009-06

在线出版日期：2013-08-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：889-897