植物罹病组织中象耳豆根结线虫的LAMP快速检测方法

摘要：

[目的]建立一种基于环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,从植物罹病组织中直接检测象耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii)的快速检测方法,为象耳豆根结线虫的监测和防治提供技术支持.[方法]根据象耳豆根结线虫与其它根结线虫ITS序列差异设计LAMP特异性引物,通过对LAMP反应条件中的Mg2+、dNTPs、甜菜碱和反应时间进行优化,同时对检测体系的特异性和灵敏度进行验证,建立一种从罹病植物组织中检测象耳豆根结线虫的LAMP快速检测方法.[结果]象耳豆根结线虫LAMP检测体系优化结果表明在Mg2+的浓度为5.0 mmol·L-1、dNTPs的浓度为2.4 mmol·L-1、不添加甜菜碱、反应时间为45 min的条件下,扩增效率最优.本研究建立的LAMP检测方法能够从11个植物线虫种群中特异检测出象耳豆根结线虫,检测灵敏度为1/200000头线虫DNA,比普通PCR灵敏1 00倍,能够直接从植物根结中检测出象耳豆根结线虫,准确度为1 00％.[结论]本研究以rDNA-ITS序列为靶基因建立象耳豆根结线虫LAMP快速分子检测方法,具有特异性强、灵敏度高、简单、快速、经济等特征,能够从罹病植物组织中快速准确地检测出象耳豆根结线虫,具有极高的实践应用价值.

关键词：象耳豆根结线虫、环介导恒温扩增、特异性、灵敏度、快速检测

所属期刊栏目：46

资助基金：国家公益性行业农业科研专项201103018

在线出版日期：2013-08-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：534-544