绿盲蝽化学感受蛋白基因AlucCSP1的克隆、表达谱分析及结合特征

摘要：

[目的]克隆、组织特异性表达以及荧光结合特征分析绿盲蝽(Apolygus lucorum Meyer-D ü r)化学感受蛋白(chemosensory protein,CSP).[方法]设计特异性引物,用RT-PCR技术克隆绿盲蝽化学感受蛋白基因AlucCSP1,使用半定量RT-PCR和Real-time PCR技术对AlucCSP1组织特异性表达进行研究,在BL2( DE3)工程菌株中用pGEX-4T-1载体进行原核表达,并在GSTrap FF柱中纯化和去标签蛋白.使用bis-hNS作为荧光配基,研究AlucCSP1蛋白与58种气味标样和5种棉花次生代谢物质的结合特征.[结果]得到了绿盲蝽化学感受蛋白基因,命名为AlucCSP1(GenBank登录号:JN573217).该序列阅读框全长393 bp,编码1 30个氨基酸残基,N端有一段长1 7个aa的信号肽,具有4个保守的半胱氨酸残基.绿盲蝽AlucCSP1几乎全部在雌虫触角中表达.构建pGEX/AlucCSP1原核表达载体,在BL21( DE3)工程菌株中表达出分子量约为39 kD的融合蛋白,用亲和层析法纯化、经凝血酶作用去除标签蛋白获得纯化的AlucCSP1蛋白,该蛋白与棉酚、单宁、槲皮素、芦丁水合物亲和力较强,结合常数分别为13.4、32.7、19.7、38.5 μmol·L-1.[结论]克隆得到绿盲蝽化学感受蛋白基因AlucCSP1,在雌性触角内特异表达,并进一步得到约13 kD的AlucCSP1纯蛋白.为研究AlucCSP1在绿盲蝽化学感器中的作用奠定了基础.

关键词：绿盲蝽、化学感受蛋白、表达谱、原核表达、纯化、竞争结合

所属期刊栏目：45

分类号：S8(畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂)

资助基金：公益性行业科研专项;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项

在线出版日期：2012-12-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：4187-4196