利用RNAi技术沉默麦长管蚜与桃蚜细胞色素P450

摘要：

[目的]通过体外饲喂双链RNA( dsRNA),利用RNAi技术沉默麦长管蚜和桃蚜体内细胞色素P450.[方法]采用PCR克隆获得麦长管蚜和桃蚜体内细胞色素P450片段;利用双链RNA合成试剂盒合成麦长管蚜和桃蚜细胞色素P450保守序列的dsRNA;在蚜虫人工饲料中,分别加入终浓度为0、3、5和7.5 ng·μL-1的dsRNA,每个试验组设置3个重复,分别于饲喂后2天、4天、6天、8天统计蚜虫的存活数；利用实时荧光定量PCR技术分析饲喂后目标基因的表达抑制情况.[结果]从麦长管蚜与桃蚜的cDNA中分别克隆细胞色素P450,所克隆片段同源性为90.1％,发现随着dsRNA浓度的增大,麦长管蚜和桃蚜的死亡率随着时间的推移不断升高,最高死亡率可分别达75.56％和64.44％.提取饲喂dsRNA浓度为7.5 ng·μL-1的不同时间段的蚜虫总RNA,实时荧光定量PCR结果表明,目的基因被沉默.[结论]利用麦长管蚜和桃蚜细胞色素P450保守序列的dsRNA,体外饲喂后,通过RNA干扰(RNAi),能够显著降低蚜虫体内细胞色素P450的表达水平,直至导致目的基因沉默和蚜虫死亡.

关键词：麦长管蚜、桃蚜、细胞色素P450、RNA干扰、双链RNA

所属期刊栏目：45

资助基金：转基因专项项目2011ZX08002-001

在线出版日期：2013-01-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：3463-3472