猪干扰素α、β和γ的融合表达及活性

摘要：

”目的”研制高效的猪基因工程干扰素制剂用于猪病毒性和肿瘤性疾病的防治.”方法”采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)技术将PoIFN-α、PoIFN-β和PoIFN-y成熟肽基因进行连接,形成3种融合基因PoIFN-α/β、PoIFN-α/y和PoIFN-β/γ,并构建到原核表达载体pET30a进行融合表达,用细胞病变抑制试验和淋巴细胞转化试验测定融合蛋白rPoIFN-α/β、rPoIFN-α/Υ和rPoIFN-β/v的生物学活性,同时与非融合干扰素rPoIFN-α、rPoIFN-β和rPoIFN-Υ进行比较分析.”结果”成功构建了3种融合基因,并在大肠杆菌中实现表达,经纯化、复性得到3种具有生物学活性的融合蛋白rPoIFN-α/β、rPoIFN-α/v和rPoIFN-β/Y.细胞病变抑制试验结果表明,无论是在Marc-145还是在PK-15细胞上,3种融合蛋白均具有较强的抗病毒活性,其抗PRRSV或VSV活性明显高于非融合的rPoIFN-α、rPoIFN-β和rPoIFN-V,体现出一定的叠加效应；MTT法检测淋巴细胞转化试验结果显示,rPoIFN-α/y和rPoIFN-β/v能有效刺激淋巴细胞转化,具有良好的免疫学活性；而rPoIFN-α/β效果不明显.说明I型与Ⅱ型PoIFN之间能协同调节免疫,而1型的不同亚型之间无明显协同作用.”结论”3种融合干扰素具有较强的抗病毒活性,可以用于猪病毒性和肿瘤性疾病的防治,其中rPoIFN-α/γ和rPoIFN-β/γ还具有较强的免疫增强作用,可被开发成新型的免疫增强剂.

关键词：猪干扰素、融合表达、抗病毒活性、细胞病变抑制、猪淋巴细胞转化

所属期刊栏目：45

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：河南省重大科技攻关项目112101110600

在线出版日期：2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1840-1847