Kisspeptin-10对无血清培养鸡F1级卵泡颗粒细胞孕酮分泌的影响及机制研究

摘要：

[目的]研究kisspeptin-10对无血清培养的鸡卵泡颗粒细胞孕酮分泌的作用及可能机制.[方法]选取200日龄处于产蛋高峰期的伊莎蛋鸡,于排卵前剖腹收集F1卵泡,分离纯化颗粒细胞,于含胎牛血清培养基中培养24 h,换成无血清培养基稳定培养24 h后,用不同浓度的Kp-10、U73122、EGTA等单独或共同处理细胞,收集细胞上清,放射免疫学方法检测培养基中孕酮含量.[结果](1)通过免疫细胞化学方法,显示颗粒细胞上有Kp-10免疫活性样物质的阳性表达；(2)Kp-10处理可显著增加无血清培养的颗粒细胞的活力,100 nmol·L-1时可显著促进孕酮的分泌(P＜0.05)；(3)与对照组相比,2μmol·L-1 U73122(磷脂酶C抑制剂)对孕酮的分泌无显著影响(P＞0.05),而0.5、2μmol·L-1 U73122能显著降低Kp-10对孕酮分泌的促进作用(P＜0.05)； (4)钙离子阻断剂Verapamil( 1-100 μmol·L-1)呈剂量依赖性降低孕酮的分泌,于100μmol·L-1时达显著降低水平(P＜0.05)；与1 μ mol·L-1Verapamil单独处理组相比,100 nmol·L-1 Kp-10与1μmol·L-1 Verapamil同时处理可显著增加孕酮的分泌,而与10、100 μ mol·L-1Verapamil共同处理不能逆转其对孕酮分泌的抑制作用(P＞0.05),且胞内钙离子含量与上清液中孕酮分泌水平相一致； (5)与100 nmol·L-1 Kp-10处理组相比,1和5mmol·L-1 EGTA共同处理时孕酮分泌显著降低,当再加入1.5 mmol·L-1 Ca2+时孕酮分泌量显著增加.[结论]Kp-10促进体外培养的鸡卵泡颗粒细胞孕酮的分泌,其机制可能与胞内Ca2+信号通路有关.

关键词：kisspeptin-10、钙离子、孕酮、颗粒细胞、伊莎褐蛋鸡

所属期刊栏目：45

分类号：S823(家畜)

资助基金：国家自然科学基金30800809

在线出版日期：2012-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：391-398