山羊SOX2多克隆抗体制备

摘要：

”目的”构建山羊Sox2原核表达载体—pRSET-Sox2,并将诱导表达、纯化的His-Sox2融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备Sox2多克隆抗体.”方法”从pMD18T-Sox2载体上以BamHI和XhoI双酶切截取Sox2 片段,然后将其亚克隆到pRSET-A表达载体上,获得pRSET-Sox2重组质粒.转化了pRSET-Sox2的大肠杆菌BL21(DE3),1 mmol·L-1IPTG 37℃诱导4h,SDS-PAGE电泳及Western blotting检测融合蛋白表达.相同条件下大量增菌诱导,用Ni- NTA argrose介质分离纯化His-Sox2重组蛋白.将体外复性的融合蛋白皮下注射新西兰大白兔,间隔2-3周注射一次,共4次.最后一次注射后7d,采血分离血清,用Western blotting检测抗体特异性.”结果”(1)原核表达载体pRSET-Sox2在大肠杆菌BL21 (DE3)得到了高效表达；(2)纯化的His-Sox2融合蛋白能够满足多克隆抗体制备的要求；(3)经Western blotting检测,Sox2多克隆抗体能与His-Sox2融合蛋白特异性结合.”结论”制备了高特异性山羊Sox2多克隆抗体,为深入探讨山羊Sox2基因的生物学功能奠定了基础,也为山羊(iPS)细胞检测创造了良好条件.

关键词：Sox2、原核表达、蛋白纯化、多克隆抗体、山羊

所属期刊栏目：45

分类号：S827;S852.4(家畜)

资助基金：广西自然科学基金桂科自0728019;桂科自0991043;广西亚热带生物资源保护与利用重点实验室开放课题SB0907

在线出版日期：2012-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：178-183