小麦WPBF与高分子量谷蛋白基因上游Prolamin-Like box的特异结合

摘要：

”目的”克隆普通小麦胚乳特异表达转录因子基因WPBF,对其原核表达条件进行优化,并验证其编码蛋白和小麦高分子量谷蛋白亚基基因(HMW-GS)上游Prolamin-Like box的结合特性,为小麦HMW-GS表达调控机制的阐明奠定基础.”方法”利用RT-PCR扩增得到WPBF编码区,将其连接到pET-21a-MBP载体中,并分别在E.coli T7 Express和Origami B(DE3)菌株中诱导表达.依次利用Amylose和Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白,最后通过凝胶迁移阻滞试验(EMSA)对重组蛋白的DNA结合特性进行分析.”结果”在33℃的Origami B(DE3)菌株中表达含MBP和His双标签的重组WPBF大部分以可溶性形式存在,其表达量占细菌总蛋白的48.0％.重组WPBF和含HMW-GS上游Prolamin-Like box的两类DNA探针能发生特异结合,但重组WPBF和含“TGCAAAG”基序DNA探针的结合强度高于其和含“TGCAAG”基序DNA探针的结合.”结论”建立了优化的WPBF原核表达系统,并获得具有生物活性的重组蛋白；重组WPBF能与HMW-GS启动子来源的两种Prolamin-Like box特异性结合,但结合能力存在差异.

关键词：小麦、WPBF、表达纯化、HMW-GS、Prolamin-Like box、凝胶迁移阻滞试验

所属期刊栏目：45

分类号：S512.1(禾谷类作物)

资助基金：国家转基因专项2008ZX08002-003;中央高校基本科研业务费专项QN2009070

在线出版日期：2012-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：7-15