内蒙古白绒山羊VEGF164基因毛囊特异性表达载体的构建及胎儿成纤维细胞的稳定转染

摘要：

”目的”构建绒山羊血管内皮生长因子164 (vascular endothelial growth factor 164,VEGF164)基因的毛囊特异表达载体并稳定转染胎儿成纤维细胞,筛选获得稳定表达红色荧光蛋白和毛囊特异表达VEGF164并可用于核移植的转基因细胞克隆.”方法”以pCDsRed2载体为基本骨架将VEGF164基因亚克隆到KAP6-1启动子下游,接续连接红色荧光蛋白表达元件,构建VEGF164基因毛囊特异表达载体pCDsRed2-KV (6.3 kb).外源表达载体以lipofectamine TM 2000介导转染胎儿成纤维细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞克隆.PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合.”结果”在构建的表达载体pCDsRed2-KV中,VEGF164基因被正确连接在毛囊特异性启动子KAP6-1下游,基因下游按顺序连接CMV启动子和红色荧光蛋白基因；外源KAP6-1启动子和VEGF164基因整合到细胞基因组中.”结论”成功构建稳定表达红色荧光蛋白和毛囊特异表达VEGF164的真核表达载体,稳定转染绒山羊胎儿成纤维细胞,为下一步通过克隆技术获得转VEGF164基因绒山羊提供了条件.

关键词：内蒙古白绒山羊、VEGF、毛囊特异性表达载体、稳定转染

所属期刊栏目：44

分类号：S827(家畜)

资助基金：转基因生物新品种培育重大专项课题研究计划项目2008ZX08008-002

在线出版日期：2012-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：4756-4762