斜纹夜蛾核型多角体病毒基因ⅡORF13的克隆、表达与启动子活性分析

摘要：

[目的]研究新发现的斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ株基因ORF13的结构与功能.[方法]根据SpltMNPVⅡ ORF13基因序列设计引物,经PCR扩增并克隆PRF13.在生物信息学分析基础上进行启动子活性分析和转录时相分析.构建ORF13片段的原核表达载体,表达并纯化融合蛋白后制备多克隆抗体.[结果]核苷酸序列分析表明,起始密码子上游-84bp处发现杆状病毒晚期启动子基序ATAAG,没有发现明显的早期启动子基序.启动子活性分析和转录时相分析证实,ORF13是一个早期和晚期都表达的基因,在病毒感染2h就开始转录,18h达到最高峰,24h以后转录水平有所下降,但基本维持恒定.pET-28a-ORF13原核表达的融合蛋白经纯化后制备的多克隆抗体特异性高,效价可达1:3200以上.[结论]SpltMNPV Ⅱ ORF13是一个早期和晚期都表达的病毒组成型结构蛋白基因.ORF13编码的蛋白可能是一种BY的膜蛋白,与细胞跨膜转运有关,制备的多克隆抗体可用于深入研究该蛋白的生物学特性与功能.

关键词：斜纹夜蛾、核型多角体病毒、ORF13、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：44

分类号：S476.1(各种防治方法)

资助基金：国家自然科学基金;苏州市科技支撑计划;苏州大学工程基金

在线出版日期：2011-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1146-1153