牛Nramp1基因启动子的克隆及其活性分析

摘要：

”目的”牛Nramp1基因是主要的抗病候选基因,但其转录调控的分子机制尚不清楚.本研究欲确定牛Nramp1基因的启动子区域,找到启动子核心序列和主要的调控区,探索Nramp1基因表达机制.”方法”采用基因克隆、DNA测序、半定量RT-PCR和荧光素酶报告基因系统等技术手段,构建牛Nramp1基因5”侧翼区长片段及固定3”端的不同节段的pEGFP-N1和/或pGL3重组质粒,分别转染293T和RAW264.7细胞,并进行脂多糖(LPS)诱导,对不同片段的启动子活性进行定性和定量测定.”结果”牛Nramp1基因5”侧翼区长片段具有较强的启动子活性,+58--89区域具有基本的启动子功能,+58--1748启动子活性最强.进一步研究表明,-89--205bp区域、-278--1495bp区域存在着正调控元件,在-205--278bp区域内存在着负调控元件;另外,LPS能显著增强启动子活性,其诱导牛Nramp1基因的表达具有细胞特异性和剂量依赖性.”结论”成功构建了含推测的牛Nramp1基因启动子片段的重组报告基因载体,确定了启动子核心区域和主要的调控区域.

关键词：牛Nramp1基因、启动子活性、调控区、LPS诱导

所属期刊栏目：44

分类号：S823(家畜)

资助基金：国家”863”计划项目2006AA10Z1D9;2007AA10Z169;山东省自然基金ZR2010CM012;公益性行业科技专项项目nyhyzx07-03609;泰山学者海外特聘专家何洪彬、转基因专项项目2009ZX08007-006B

在线出版日期：2011-06-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1022-1028