圆锥小麦ramosa2的克隆及其重组蛋白的DNA结合特性分析

摘要：

[目的]从四倍体圆锥小麦中克隆ramosa2(TtRa2),分析其序列特征、组织表达特异性和体外活性,为阐明ramosa2与麦类作物穗形态建成关系奠定基础.[方法]利用半定量RT-PCR分析ramosa2在不同组织中的表达水平,将其重组到pET-21a-MBP载体并在T7 Express菌株中诱导表达.利用Amylose亲和层析柱纯化重组蛋白,通过凝胶阻滞试验对其DNA特异结合能力进行鉴定.[结果]TtRA2含有LOB和RA2结构域,属于Ⅰ类LBD蛋白家族成员.TtRa2在幼穗中高丰度表达,而在根、茎、叶、种子中未检测到表达.融合的TtRA2主要以可溶性形式存在,其表达量占总蛋白的68.6%.重组TtRA2可与包含核心序列"GCGGCG"的DNA探针特异性结合,两者形成的复合体的解高常数约为10 nmol·L-1.[结论]Ttga2参与圆锥小麦穗形态建成,其编码产物具备RA2-1 ike转录因子的典型特征,具有类似拟南芥LOB的DNA结合特性.

关键词：圆锥小麦、ramosa2、原核表达、LOB结构域、凝胶迁移阻滞分析

所属期刊栏目：44

分类号：S5(农作物)

资助基金：国家转基因生物新品种培育重大专项;中央高校基本科研业务费专项;西北农林科技大学青年学术骨干支持计划

在线出版日期：2011-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：439-446