牛呼吸道合胞体病毒重组N蛋白间接ELISA方法的建立及应用

摘要：

”目的”以纯化的牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)HJ株重组N蛋白作为包被抗原,对各项条件进行优化,确定判定标准,建立检测BRSV抗体的间接ELISA方法.”方法”将已构建的重组菌BL21(DE3)进行诱导表达,获得重组N蛋白.利用电洗脱法对表达产物进行纯化,并用Western blot对表达产物进行鉴定.以纯化后的重组N蛋白作为诊断抗原,对ELISA反应条件进行优化,初步建立检测BRSV抗体的间接ELISA诊断方法.”结果”成功表达并纯化了BRSV HJ株重组N蛋白,Western blot检测结果证明表达产物具有良好的反应原性.以重组N蛋白作为诊断抗原,建立了间接ELISA诊断方法.交叉试验结果表明重组N蛋白与牛无浆体病(Anaplasmosis)、牛传染性鼻气管炎(IBRV)和牛副流感(BPIV)阳性血清均不发生交叉反应.与中和试验(SNT)相比较,该方法的特异性、敏感性和符合率分别为85.0%、90.9%和87.7%.采用本试验建立的间接ELISA方法对黑龙江省的牡丹江,佳木斯、鹤岗和大庆4个地区牛场的600份牛血清进行了检测,结果表明,黑龙江省部分地区BRSV的抗体阳性率为27.33%.”结论”本研究建立的间接ELISA方法具有较好的特异性、敏感性和重复性,利用该方法初步证实黑龙江省部分地区存在牛呼吸道合胞体病.这一研究为牛呼吸道合胞体病诊断试剂盒的研制奠定了基础,并为该病的诊断与流行病学调查提供有效的技术手段.

关键词：牛呼吸道合胞体病毒、重组N蛋白、间接ELISA、初步应用

所属期刊栏目：43

分类号：S8(畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂)

资助基金：黑龙江省科技局攻关项目GB05B501;大庆市科技局资助项目SGG2006-010

在线出版日期：2010-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：4303-4309