普通烟草铁氧还蛋白Ⅰ的原核表达、抗体制备及在ToMV侵染烟草体内表达分析

摘要：

[目的]构建普通烟草铁氧还蛋白Ⅰ(ferredoxin Ⅰ,Fdn-Ⅰ)原核表达载体,表达可溶性Fdn-Ⅰ蛋白,并制备其多克隆抗体,分析Fdn-Ⅰ在ToMV侵染烟草叶片内的表达情况.[方法]以Fdn-Ⅰ全长cDNA为模板,用PCR扩增Fdn-Ⅰ,克隆至原核表达载体pEGX-6p-1,构建Fdn-Ⅰ与GST融合表达载体pEGX-Fdn-Ⅰ,重组质粒转化原核表达菌株BL21,优化GST-Fdn-Ⅰ可溶性表达条件后大量表达蛋白,用GST亲和层析法纯化获得可溶性GST-Fdn-Ⅰ蛋白,免疫家兔制备多克隆抗体.ELISA测定抗体效价,Western印迹法检测抗体的特异性和ToMV侵染前后烟草叶片内Fdn-Ⅰ的表达情况.[结果]在温度为28℃,IPTG诱导浓度为0.3 mmol·L-1条件下表达出大小为41.3 kD的可溶性融合蛋白.纯化获得约4 mg可溶性蛋白,免疫家兔制备了效价为1/6 400的多克隆抗体.Western印迹结果表明,该抗体可以与Fdn-Ⅰ的原核和酵母表达产物特异性结合.分析表明Fdn-Ⅰ在ToMV侵染后烟草叶片内含量明显低于其在健康烟草叶片内的含量.[结论]通过Fdn-Ⅰ大肠杆菌中的可溶性表达,制备获得了其高效价特异性多克隆抗体,利用该抗体检测表明ToMV侵染烟草降低了Fdn-Ⅰ的表达.

关键词：铁氧还蛋白Ⅰ、原核表达、抗体、番茄花叶病毒

所属期刊栏目：43

分类号：S5(农作物)

资助基金：国家自然科学基金;中国博士后科学基金;中央高校基本科研业务费专项

在线出版日期：2010-12-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：3981-3987