同源重组敲除MSTN基因的猪胎儿成纤维细胞的构建

摘要：

[目的]获得敲除肌肉生长抑制素(MSTN)基因的猪胎儿成纤维细胞.[方法]打靶载体的构建:以Neo为正筛选基因、RSV-tk为负筛选基因.在Neo的两侧分别插入同源长臂和同源短臂.同源长臂5 382 bp,包含MSTN基因的部分5'端,全部的exon1,intron1和exon2及大部分intron2;同源短臂844 bp,包含部分exon3及3'端的部分序列.取35 d胎龄的大白猪,用胰酶消化法,分离胎儿成纤维细胞并对其进行培养和建系.采用脂质体法将打靶载体导入胎儿成纤维细胞中,转染后的细胞采用250 μg·ml-1 G418筛选7 d,再用200 μg·ml-1G418+2 μmol·-1 GANC维持筛选.用RT-PCR法检测转染前转染后细胞MSTN基因表达量.[结果]成功构建了对猪MSTN基因部分intron2和exon3区域进行敲除的替代型打靶载体.共得到5个具有药物抗性的细胞克隆,经PCR检测,其中一个细胞克隆发生了正确的同源重组.转染后细胞MSTN基因表达量明显降低.[结论]获得了敲除MSTN基因的猪胎儿成纤维细胞.

关键词：猪、胎儿成纤维细胞、基因打靶、肌肉生长抑制素

所属期刊栏目：42

分类号：S8(畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂)

资助基金：黑龙江省科技攻关计划GB01B104

在线出版日期：2009-09-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：2972-2977