重叠延伸PCR法扩增猪囊尾蚴AgB基因及其在BHK-21细胞中的表达
”目的”克隆猪囊尾蚴AgB基因并在体外细胞中表达.”方法”采用RT-PCR法分别扩增AgB基因的上半段和下半段序列.采用重叠延伸PCR法(splicing overlap extension PCR mothod,SOE-PCR)把具有35个相同碱基的上下半段扩增为全长基因,并构建到真核表达载体pVAX1,将酶切,PCR、测序鉴定的阳性质粒经脂质体转染BHK-21细胞.通过SDS-PAGE、Western-blotting、间接免疫荧光法,检测细胞中B抗原的表达.”结果”琼脂糖凝胶电泳显示扩增的不同片段大小分别与预期的相同.重组表达载体转染BHK细胞后有荧光出现.表达的蛋白能被猪囊尾蚴病阳性血清所识别. ”结论”通过重叠延伸PCR法成功扩增了AgB基因全长并构建到真核表达载体,目的蛋白在BHK-21细胞中表达.
猪囊尾蚴、AgB基因、重叠延伸PCR、真核表达、BHK-21
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S8(畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂)
国家高技术研究发展计划863计划2006AA10A207;国家科技支撑计划2007BAD40B03
2009-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
2572-2578
