高效、新T-DNA侧翼序列分离技术——Actail-PCR

摘要：

[目的]建立一种有效分离T-DNA插入突变体侧翼基因组序列的方法.[方法]分离侧翼的目标基因组序列是利用T-DNA标签法研究植物功能基因组学的一个关键步骤,笔者发展稳定高效的Actail-PCR分高技术.该技术一侧引物来自于T-DNA载体,另一侧引物为一个复性控制引物.复性控制引物在3'端为一个14 bp的随机简并引物,在5'端非目标尾部序列接上一个通用引物,中间由5个多聚脱氧次黄嘌呤核苷(poly(d1))连接.[结果]Actail-PCR技术将随机简并引物重新编辑成复性控制引物,在40℃的低严谨条件下,3'端的随机简并引物可以与T-DNA插入突变体的侧翼目标区段随机的结合,扩增得到目标片段,随后利用5'端的通用引物与T-DNA载体上的巢式引物依次组合,在65℃(10个循环后逐步降温至58℃)的高严谨条件下逐步扩增特异片段,同时抑制非特异性扩增,可以显著提高目标片段的扩增效率,减少假阳性.[结论]相对传统的TAIL-PCR,Actail-PCR技术可以更高效地分离T-DNA插入突变体的侧翼基因组序列.

关键词：T-DNA、侧翼序列、TAIL-PCR、Actail-PCR

所属期刊栏目：42

分类号：S1(农业基础科学)

资助基金：上海市浦江人才计划;重大基础研究项目;农青科技200801

在线出版日期：2009-05-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1447-1451