亚洲棉(Gossypium arboreum L.)全生育期均一化全长cDNA文库的构建和鉴定

摘要：

[目的]构建二倍体亚洲棉石系亚1号全生育期均一化全长cDNA文库,建立亚洲棉功能基因组学研究基础平台,发掘亚洲棉发育、抗逆等相关基因.[方法]取石系亚1号子叶期、苗期、蕾期,花铃期不同组织器官,提取总RNA并分离纯化mRNA,采用SMART技术反转录全长双链cDNA.用DSN(duplex-specific nuclease)法对全长双链cDNA进行均一化,均一化的cDNA连接到入ZAPⅡ载体,包装蛋白包装后构建石系亚1号全生育期均一化全长cDNA文库.[结果]初级文库滴度4×106 pfu·ml-1,库容2×106 个独立克隆,重组率大于95%,插入片段平均长度大于1.5 kb.随机挑取192个克隆进行EST(expressed sequence tags)测序,冗余度仅为3.49%,BLASTN比对结果显示:78.31%的EST为新EST.[结论]文库均一化效果良好,质量符合要求,可能包含大量新基因,是进行EST测序、发掘新基因等棉花功能基因组学的研究平台.

关键词：亚洲棉、全生育期、均一化、cDNA文库、EST

所属期刊栏目：42

分类号：S5(农作物)

资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）;引进国际先进农业科学技术计划计划

在线出版日期：2009-05-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1158-1164