铜绿假单胞菌algL基因在毕赤酵母中的表达及其性质研究

摘要：

”目的”通过构建毕赤酵母工程菌株,以期获得重组海藻酸裂解酶,并对其性质加以研究.”方法”采用PCR的方法,以铜绿假单胞菌(Pscudomonas aeruginosa)基因组DNA为模板,克隆出约1.0kb的海藻酸裂解酶基因algL的成熟蛋白编码序列,并将其插入巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC9K-algL.重组质粒线性化后用聚乙二醇(PEG)法导入毕赤酵母菌株GS115中表达.”结果”用甲醇诱导培养基进行摇瓶发酵,表达得到40kD的目的蛋白,酶活力达540U·ml-1左右.经测定,该重组酶的最适反应pH为8.5,最适反应温度为40°C,并且在20～45℃,pH 3.0～12.0具有较好的稳定性.50mmol·L-1的Co2+和Ca2+对酶活力均有显著的促进作用,Zn2+、Cu2+和Fe2+在不同浓度下对酶活力均有不同程度的抑制作用.在重组酶的辅助作用下,抗生素的抑菌效果明显提高.”结论”用重组毕赤酵母可高效表达外源海藻酸裂解酶,为其今后在工农业中的应用奠定了基础.

关键词：海藻酸裂解酶、毕赤酵母、海藻寡糖、诱导表达

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分类号：S43;TQ9

资助基金：国家”973”计划课题2004CB117500;国家”863”计划课题2005AA246010;国际科技合作重点项目计划课题2005DFA31070

在线出版日期：2008-07-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1192-1198