H9N2亚型猪流感病毒NS1基因的克隆表达及反应原性分析

摘要：

[目的] 对H9N2亚型猪流感病毒NS1(nonstructural protein 1)基因进行原核表达,获得纯化表达产物,以期为检测猪流感抗体的 ELISA试剂盒的研制奠定基础.[方法] 采用RT-PCR扩增了猪流感病毒(H9N2)的NSl基因,将其克隆于表达载体pET-28a(+)上构建成重组质粒pET-NS1,转化受体菌E. coli BL21-DE3感受态细胞,经酶切鉴定及序列分析,筛选出正确重组质粒转化子.[结果] 经终浓度5 mmo1.L-1乳糖诱导,SDS-PAGE 电泳结果显示,重组蛋白NSl得到大量表达,分子质量约为26kD.经Western-blotting分析,表达蛋白能与阳性血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应;ELISA检测显示,在被检血清稀释1 280倍时,阳性血清的OD650 值大约是阴性血清的3倍,差异明显. [结论] 重组蛋白BS1表达量高,易于纯化并且具有良好的血清学反应的特异性.

关键词：猪流感病毒、NS1基因、反应原性

所属期刊栏目：41

分类号：S5(农作物)

资助基金：浙江省科技计划2004C22044

在线出版日期：2008-05-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：587-592