地高辛标记探针检测5种葫芦科作物病毒的斑点杂交方法

摘要：

[目的]探索5种葫芦科作物病毒即小西葫芦黄花叶病毒(Zuccini yellow mosaic virus,ZYMV)、西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、番木瓜环斑病毒西瓜株系(Papaya ringspot virus watermelon strain,PRSV-W)和南瓜花叶病毒(Squash mosaic virus,SqMV)的斑点杂交检测技术,为葫芦科作物种子带毒的快速准确鉴定、流行病学研究和转基因检测等提供技术和方法.[方法]以构建的重组质粒为模板,用PCR方法合成了相应的地高辛标记的cDNA探针.通过斑点杂交检测西葫芦病叶汁液来考察探针的灵敏性和特异性.同时设计了3种不同长度的SqMV探针(0.55、1.6、2.7 kb)对杂交效果进行了研究.[结果]ZYMV、WMV、CMV、PRSV-W和SqMV的5种探针检测各自侵染西葫芦病汁液的稀释低限分别为1:160、1:160、1:320、1:160、1:320,而每种探针与健康西葫芦和其它4种病毒的反应均为阴性.不同长度的SqMV探针杂交结果相同.[结论]用PCR方法合成的地高辛标记的探针,能够直接在植物组织中将5种病毒检测出来,具有较好的灵敏性、特异性和重复性.探针的长度对杂交的灵敏性和特异性没有影响.

关键词：聚合酶链反应(PCR)、地高辛标记探针、斑点杂交、ZYMV、WMV、CMV、PRSV-W、SqMV

所属期刊栏目：40

分类号：S4(植物保护)

资助基金：国家重点基础研究发展计划（973计划）;国家质检总局项目

在线出版日期：2008-05-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：2741-2746