中间偃麦草2Ai-2染色体DNA文库构建及特异性序列的克隆

摘要：

以二体异附加系Z2与其普通小麦亲本宛7107杂交F,的花粉母细胞为材料,用原位杂交方法确定其中的单价体为中间偃麦草2Ai-2染色体;在此基础上,以显微分离、回收、LA-PCR(Linker-adaptor PCR)扩增了该条染色体,扩增产物长度在0.15～3kb之间,主要分布在0.2～2kb.以α-3 2P-dCTP标记的中间偃麦草的基因组DNA为探针,对LA-PCR扩增产物进行杂交,证实扩增产物来自中间偃麦草.将扩增片段纯化后连接到质粒载体pUCl 8上,构建了2Ai-2染色体DNA文库.该文库包含约5 × 105个克隆.随机选取500个克隆进行分析,发现插入片段长200-1500 bp,平均580 bp.点杂交结果表明,56%为低/单拷贝序列,44%为重复序列.从文库筛选到4个中间偃麦草克隆.RFLP结果表明,3个为多态性低拷贝(Mag065、Mag088、Mag139),1个为高度重复序列克隆(Mag104).GISH结果表明,Mag104为中间偃麦草染色体专化重复序列.

关键词：中间偃麦草、染色体微分离及微克隆、LA-PCR、RFLP、特异性DNA序列

所属期刊栏目：37

分类号：S512.1(禾谷类作物)

资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）101-04-03-03-97

在线出版日期：2004-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：163-169