PCR-RFLP筛选DNA文库克隆Bt cry基因的研究

摘要：

Bt菌株C002对水稻二化螟、甜菜夜蛾具有高毒力,PCR-RFLP鉴定含有cry1Aa、cry2Ab、cry1Ca和未知杀虫蛋白基因cryX等,其中cry1Ca位于染色体DNA 6～9kb的EcoR Ⅰ片段.染色体和质粒DNA分别经EcoRⅠ完全酶切和Sau3AⅠ部分酶切、电泳回收6～9kb片段.E.coli-Bt穿梭载体pHT315分别与目的DNA连接、转化大肠杆菌感受态细胞后获得了相应的DNA文库.约50个转化子合为一个转化子池,采用PCR-RFLP方法快速检测,分别从约2 000质粒DNA文库转化子和400个染色体文库转化子中筛选获得了cry1Aa、cry2Ab、cry1Ca和未知基因cryX的阳性克隆,相应命名为pHT-1Aa、pHT-1Ca、pHT-2Ab和pHT-X.限制酶切分析表明,含有cry1Aa、cry1Ca和cry2Ab基因的克隆片段均含有相应基因的保守物理图谱.进一步将这些质粒分别导入Bt无晶体突变株CryB-,SDS-PAGE分析表明,只有cry1Ca表达了约130 ku杀虫晶体蛋白.初步杀虫生测结果显示,cry1Ca对甜菜夜蛾具有高毒力,7 d校正死亡率为100%.

关键词：苏云金芽孢杆菌、DNA文库、PCR-RFLP、杀虫蛋白基因、基因克隆

所属期刊栏目：36

分类号：Q94(植物学)

资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）2001-AA-214011

在线出版日期：2004-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：398-402