LIPI-4 EⅡ对单核细胞增生性李斯特菌关键毒力因子转录调控的影响

摘要：

为探究单核细胞增生性李斯特菌(LM)毒力岛4(LIPI-4)中膜透性酶(EⅡ)对LM毒力基因表达的调控作用,本研究分别构建EⅡ缺失株(LM928ΔEⅡ)、强启动子回补株(CLM928ΔEⅡ-Phelp)和天然启动子回补株(CLM928ΔEⅡ-Pnative),测定各菌株在体外培养中的生长曲线和在永生化人脑微血管内皮细胞(HCMEC/D3)内的增殖情况;RT-qPCR检测体外培养和HCMEC/D3细胞内各菌株9个关键毒力基因的转录水平.结果显示:1)EⅡ基因缺失株LM928ΔEⅡ构建成功,重组回补质粒pIMK2-EⅡ和pIMK2-EⅡ-Pnative及回补株CLM928ΔEⅡ-Phelp和CLM928ΔEⅡ-Pnative构建成功.2)在体外培养下,EⅡ对LM的生长曲线没有影响.但在侵染HCMEC/D3后,LM928ΔEⅡ在8和12 h的胞内细菌量显著高于LM928(P＜0.05),2和4 h的胞内细菌量极显著高于LM928(P＜0.01),CLM928ΔEⅡ-Pnative在 2、4 和 6 h 恢复至野生株水平(P＞0.05),而 CLM928ΔEⅡ-Phelp在 2、4、6、8、10和12 h均极显著低于野生株(P＜0.01).3)体外培养条件下,相比于野生株,LM928ΔEⅡ中66.7％(6/9)的毒力基因转录水平极显著上调(P＜0.01);CLM928ΔEⅡ-Phelp中66.7％(6/9)的基因转录水平上升1～4倍,CLM928ΔEⅡ-Pnative中88.9％(8/9)的基因转录水平倍数变化在1倍以内.在HCMEC/D3细胞内,相比于野生株,LM928ΔEⅡ中66.7％(6/9)的毒力基因转录水平极显著上调(P＜0.01);CLM928ΔEⅡ-Phehp中33.3％(3/9)的基因转录水平上调1～3倍,CLM928ΔEⅡ-Pnative中基因转录水平倍数变化在1倍以内.综上,LIPI-4 EⅡ对LM关键毒力因子的转录具有负调控作用.本研究为系统探究LIPI-4参与LM致病性机制奠定基础.

关键词：单核细胞增生性李斯特菌、LIPI-4、膜透性酶(EⅡ)、缺失株、毒力基因

所属期刊栏目：28

分类号：S852.61+2(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家重点实验室开放基金;动物疾病防控兵团重点实验室开放课题

在线出版日期：2023-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：191-202