雄激素受体及共调节因子在睾酮调节绵羊附睾GPX5表达中的作用分析

摘要：

为探究雄激素受体(Androgen receptor,AR)及共调节因子对绵羊附睾上皮细胞(Epididymal epithelial cells,EECs)谷胱甘肽过氧化物酶5(Glutathione peroxidase 5,GPX5)的调节机制,本研究采用CCK-8检测睾酮对EECs增殖的影响;利用qRT-PCR、免疫荧光法和Western Blot法分别检测AR、GPX5、甾体激素受体共激活子1(Steroid receptor coactivator 1,SRC-1)、CREB 结合蛋白(cAMP-response element-binding protein,CBP)、p300 和核受体共抑制因子2(Nuclear receptor corepressor 2,NCOR2)的mRNA水平和蛋白表达情况,采用双荧光素酶报告基因测定干扰SRC-1或p300后EECs的荧光素酶活性.结果表明:1)与对照组相比,100 nmol/L睾酮组细胞中的GPX5 mRNA和蛋白表达量极显著升高(P＜0.01),1000 nmol/L睾酮组细胞中的GPX5 mRNA和蛋白表达量差异不显著(P＞0.05),但分别极显著(P＜0.01)和显著(P＜0.05)低于100 nmol/L睾酮组;100 nmol/L睾酮组细胞中的AR mRNA和蛋白表达量分别呈极显著(P＜0.01)和显著(P＜0.05)高于对照组,然而1 000 nmol/L睾酮组细胞中的AR mRNA和蛋白的表达量显著低于对照组(P＜0.05);1 000 nmol/L睾酮组细胞中的CBP、p300、SRC-1蛋白表达极显著高于对照组(P＜0.01),特别是核内的表达量明显增高.2)与对照组相比,siRNA-AR组细胞中的GPX5 mRNA和蛋白的表达量差异不显著(P＞0.05),而SRC-1和p300蛋白表达量极显著升高(P＜0.01).pcDNA3.1-AR组GPX5 mRNA和蛋白表达量较对照组呈极显著(P＜0.01)和显著(P＜0.05)升高.3)siRNA-SRC-1和siRNA-p300组细胞中的GPX5 mRNA和蛋白表达量较对照组均显著降低(P＜0.05),而AR的蛋白表达量与对照组差异不显著(P＞0.05),AR的转录活性显著降低(P＜0.05).综上,睾酮对绵羊EECs GPX5、AR及其共调节因子的表达具有浓度依赖性的调节效应,睾酮通过AR及其共调节因子SRC-1和p300/CBP的协同调节GPX5表达.本研究为探究GPX5在绵羊附睾中的调节机制提供理论依据.

关键词：附睾上皮细胞、谷胱甘肽过氧化物酶5、睾酮、雄激素受体、共调节因子

所属期刊栏目：28

分类号：Q826.9

资助基金：内蒙古自治区科技重大专项;内蒙古自治区自然科学基金项目

在线出版日期：2023-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共15页

页码：94-108